| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-24页 |
| 1.1 马铃薯晚疫病概述 | 第12-15页 |
| 1.1.1 马铃薯晚疫病的危害 | 第12页 |
| 1.1.2 马铃薯晚疫病的防治 | 第12-13页 |
| 1.1.3 转基因马铃薯的晚疫病抗性研究现状 | 第13-15页 |
| 1.1.4 田间创建抗病基因近等混合系的基础 | 第15页 |
| 1.2 不依赖连接的克隆方式 | 第15-18页 |
| 1.2.1 LIC 技术的基本原理 | 第15-17页 |
| 1.2.2 LIC 技术的优势 | 第17页 |
| 1.2.3 三亲本融合 | 第17-18页 |
| 1.3 农杆菌介导的植物转化 | 第18-21页 |
| 1.3.1 农杆菌 | 第18页 |
| 1.3.2 Ti 质粒 | 第18-19页 |
| 1.3.3 农杆菌转化植物的过程 | 第19-20页 |
| 1.3.4 转基因植物中外源基因的检测 | 第20-21页 |
| 1.4 转基因马铃薯的生物安全性评价和展望 | 第21-22页 |
| 1.5 研究的目的及意义 | 第22-24页 |
| 1.5.1 主要研究内容 | 第22页 |
| 1.5.2 主要技术路线 | 第22-24页 |
| 2 无标记载体 pMF-LIC 构建 | 第24-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-25页 |
| 2.1.1 工具酶及主要抗生素和激素 | 第24页 |
| 2.1.2 菌株及质粒 | 第24页 |
| 2.1.3 引物 | 第24-25页 |
| 2.1.4 培养基配置 | 第25页 |
| 2.1.5 溶液配制 | 第25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-30页 |
| 2.2.1 目的片段 LIC 序列的扩增 | 第25-26页 |
| 2.2.2 目的片段 PCR 产物凝胶回收 | 第26-27页 |
| 2.2.3 质粒 pMF-GUS 的提取 | 第27-28页 |
| 2.2.4 质粒 pMF-GUS 的纯化 | 第28-29页 |
| 2.2.5 LIC 回收产物和质粒 pMF-GUS 的双酶切 | 第29页 |
| 2.2.6 双酶切产物回收后的连接 | 第29-30页 |
| 2.2.7 连接产物转化感受态细胞 DB3.120 | 第30页 |
| 2.2.8 阳性克隆子的筛选 | 第30页 |
| 2.3 结果与分析 | 第30-33页 |
| 2.3.1 目的片段 LIC 序列的扩增 | 第30-31页 |
| 2.3.2 目的片段 LIC 的回收产物和质粒 pMF-GUS 的双酶切 | 第31页 |
| 2.3.3 连接产物转化大肠杆菌 DB3.121 | 第31-32页 |
| 2.3.4 阳性克隆子的菌落 PCR 鉴定 | 第32页 |
| 2.3.5 阳性克隆子质粒 PCR 及酶切鉴定 | 第32-33页 |
| 2.4 讨论 | 第33-34页 |
| 2.5 小结 | 第34-35页 |
| 3 抗晚疫病工程农杆菌 AGL0-pMF-R1/RB/R3a 的获得 | 第35-45页 |
| 3.1 实验材料 | 第35-36页 |
| 3.1.1 工具酶及主要抗生素 | 第35页 |
| 3.1.2 菌株及质粒 | 第35页 |
| 3.1.3 引物 | 第35-36页 |
| 3.1.4 培养基配置 | 第36页 |
| 3.2 实验方法 | 第36-39页 |
| 3.2.1 抗晚疫病基因 R1、RB、R3a 的获得 | 第36-37页 |
| 3.2.2 无标记载体 pMF-LIC 酶切 | 第37页 |
| 3.2.3 抗晚疫病基因与无标记载体 pMF-LIC 的 LIC 连接 | 第37-38页 |
| 3.2.4 重组载体阳性克隆子的筛选 | 第38页 |
| 3.2.5 工程农杆菌的三亲本融合及筛选鉴定 | 第38-39页 |
| 3.3 结果与分析 | 第39-43页 |
| 3.3.1 抗晚疫病基因 R1、RB、R3a 的获得 | 第39-40页 |
| 3.3.2 无标记载体 pMF-LIC 酶切 | 第40页 |
| 3.3.3 LIC 连接产物转化大肠杆菌 TOP10 的阳性克隆筛选 | 第40-42页 |
| 3.3.4 工程农杆菌 AGL0-pMF-R1/RB/R3a 的筛选鉴定 | 第42-43页 |
| 3.4 讨论 | 第43页 |
| 3.5 小结 | 第43-45页 |
| 4 无选择标记抗晚疫病转基因马铃薯植株的获得 | 第45-51页 |
| 4.1 实验材料 | 第45页 |
| 4.1.1 植物激素及抗生素 | 第45页 |
| 4.1.2 培养基配置 | 第45页 |
| 4.2 实验方法 | 第45-47页 |
| 4.2.1 马铃薯品种 Desiree 的转化与再生 | 第45-46页 |
| 4.2.2 抗晚疫病转基因马铃薯的 PCR 检测 | 第46-47页 |
| 4.3 结果与分析 | 第47-50页 |
| 4.3.1 马铃薯的遗传转化 | 第47-49页 |
| 4.3.2 转基因植株的 PCR 鉴定 | 第49-50页 |
| 4.4 讨论 | 第50页 |
| 4.5 小结 | 第50-51页 |
| 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-56页 |
| 在学研究成果 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
