| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第10-28页 |
| 1.1 小鼠胚胎干细胞研究 | 第10-16页 |
| 1.1.1 胚胎干细胞研究历史 | 第10-11页 |
| 1.1.2 胚胎干细胞多能性的维持 | 第11-12页 |
| 1.1.3 多能性干细胞的naive与primed状态 | 第12-14页 |
| 1.1.4 胚胎干细胞的临床应用与挑战 | 第14-16页 |
| 1.2 Nanog基因与多能性调节 | 第16-19页 |
| 1.2.1 Nanog蛋白结构 | 第16-17页 |
| 1.2.2 Nanog在多能性细胞维持当中所受的调节 | 第17页 |
| 1.2.3 Nanog在多能性细胞分化当中所受的调节 | 第17-18页 |
| 1.2.4 Nanog的自我调节 | 第18-19页 |
| 1.3 胚胎干细胞基因编辑技术的研究现状 | 第19-23页 |
| 1.3.1 锌指核酶(ZFNs) | 第19-20页 |
| 1.3.2 转录激活子效应因子-TALENs | 第20-21页 |
| 1.3.3 成簇的、规律间隔的短回文重复序列CRISPR/Cas9 | 第21-23页 |
| 1.4 不同基因修复机制下CRISPR-Cas系统的应用 | 第23-25页 |
| 1.4.1 基于非同源末端连接修复机制的CRISPR-Cas系统的应用 | 第23-24页 |
| 1.4.2 基于同源重组修复机制的CRISP民-Cas系统的应用 | 第24-25页 |
| 1.5 多能性干细胞的培养体系 | 第25-28页 |
| 1.5.1 小鼠胚胎干细胞的培养体系 | 第25-26页 |
| 1.5.2 人胚胎干细胞的培养体系 | 第26-28页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第28-46页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-34页 |
| 2.1.1 实验所用动物以及细胞来源 | 第28页 |
| 2.1.2 实验所用主要仪器 | 第28-30页 |
| 2.1.3 实验所用试剂耗材 | 第30-31页 |
| 2.1.4 实验所用引物序列 | 第31页 |
| 2.1.5 实验用培养基以及主要试剂的配制 | 第31-34页 |
| 2.2 实验方法 | 第34-46页 |
| 2.2.1 Nanog-EGFP-mESC建系与扩增 | 第34-36页 |
| 2.2.2 用CRISPR-Cas9技术构建Nanog-EGFP小鼠胚胎干细胞 | 第36-43页 |
| 2.2.3 基于N2B27的Nanog-EGFP-ESC培养液的筛选 | 第43-46页 |
| 第三章 实验结果 | 第46-54页 |
| 3.1 ES细胞系的建立 | 第46-47页 |
| 3.2 Nanog—EGFP-ESC的构建 | 第47-49页 |
| 3.3 基于N2B27的Nanog-EGFP-ESC培养液的筛选 | 第49-54页 |
| 第四章 讨论 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-64页 |
| 附录 | 第64-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
