| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 英文缩略词表 | 第11-12页 |
| 引言 | 第12-14页 |
| 第一部分 第二代嵌合抗原受体PCDH-CD28-CAR的构建及慢病毒的制备 | 第14-36页 |
| 1.1 序言 | 第14-15页 |
| 1.2 材料、试剂、溶液配制、仪器 | 第15-18页 |
| 1.2.1 实验材料 | 第15页 |
| 1.2.2 实验试剂 | 第15-16页 |
| 1.2.3 溶液配制 | 第16-18页 |
| 1.2.4 实验仪器 | 第18页 |
| 1.3 实验方法 | 第18-30页 |
| 1.3.1 合成基因片段Hinge-TM-CD28-CD3ζ | 第18-21页 |
| 1.3.2 Hinge-TM-CD28-CD3ζ与pCDH-EF1-MCS-T2A-copGFP的连接 | 第21-23页 |
| 1.3.3 PCR扩增基因片段scFvEGFRvIII | 第23-25页 |
| 1.3.4 scFvEGFRvIII基因片段克隆入载体pCDH-CD28-CD3ζ | 第25-27页 |
| 1.3.5 慢病毒的制备与滴度的测定 | 第27-30页 |
| 1.4 结果 | 第30-33页 |
| 1.4.1 pCDH-CD28-CD3ζ载体鉴定 | 第30-31页 |
| 1.4.2 pCDH-CD28-CAR载体鉴定 | 第31-32页 |
| 1.4.3 慢病毒的制备及滴度的测定 | 第32-33页 |
| 1.5 讨论 | 第33-36页 |
| 第二部分 EGFRVIII/CD28-CAR~+T细胞的体外生物学效应 | 第36-54页 |
| 2.1 序言 | 第36-37页 |
| 2.2 材料、试剂、溶液配制、仪器 | 第37-40页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第37页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第37-38页 |
| 2.2.3 溶液配制 | 第38-39页 |
| 2.2.4 实验仪器 | 第39-40页 |
| 2.3 实验方法 | 第40-47页 |
| 2.3.1 Dynabeads& | 第40-41页 |
| 2.3.2 CD3~+T细胞的激活和扩增 | 第41页 |
| 2.3.3 LV-EGFRvIII/CD28-CAR感染T淋巴细胞 | 第41-42页 |
| 2.3.4 Western blot检测T细胞内EGFRvIII/CD28-CAR的表达 | 第42-44页 |
| 2.3.5 流式细胞术检测T细胞表面EGFRvIII/CD28-CAR的表达 | 第44-45页 |
| 2.3.6 ELISA法检测EGFRvIII/CD28-CAR~+T细胞IFN-γ的分泌 | 第45-46页 |
| 2.3.7 EGFRvIII/CD28-CAR~+T细胞的细胞毒性检测 | 第46-47页 |
| 2.4 结果 | 第47-50页 |
| 2.4.1 Dynabeads Human T-Activator CD3/CD28扩增的CD3+T细胞 | 第47页 |
| 2.4.2 Western blot检测T细胞内EGFRvIII/CD28-CAR的表达 | 第47-48页 |
| 2.4.3 流式细胞术检测EGFRvIII/CD28-CAR在T细胞表面的表达 | 第48-49页 |
| 2.4.4 ELISA法检测EGFRvIII/CD28-CAR~+T细胞IFN-γ分泌 | 第49页 |
| 2.4.5 ~(51)Cr释放法检测EGFRvIII/CD28-CAR~+T细胞的杀伤作用 | 第49-50页 |
| 2.5 讨论 | 第50-54页 |
| 第三部分 结论 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 文献综述 | 第60-68页 |
| 参考文献 | 第65-68页 |
| 致谢 | 第68-70页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第70-71页 |
