摘要 | 第4-5页 |
ABSTRACT | 第5-7页 |
第一章 引言 | 第11-22页 |
1.1. 斑节对虾 | 第11页 |
1.2. 斑节对虾的卵巢发育 | 第11-12页 |
1.3. 蛋白质组学 | 第12-18页 |
1.3.1. 蛋白质组学(Proteomics) | 第12-14页 |
1.3.2. 蛋白质组学研究技术 | 第14-17页 |
1.3.3. 生物信息学分析 | 第17页 |
1.3.4. 蛋白质组学在水产养殖生物上的研究进展 | 第17-18页 |
1.4. UPP的组成与特性及其在生殖调控中的研究 | 第18-20页 |
1.4.1. UPP的组成及其特性 | 第18-20页 |
1.4.2. 泛素系统在虾蟹类中的研究进展 | 第20页 |
1.5. 本研究的目的和意义 | 第20-22页 |
第二章 斑节对虾卵巢发育Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期的蛋白质组研究 | 第22-47页 |
2.1. 实验材料 | 第22-23页 |
2.1.1 斑节对虾 | 第22页 |
2.1.2 主要试剂及仪器 | 第22-23页 |
2.2. 实验方法 | 第23-30页 |
2.2.1. 卵巢组织切片 | 第23页 |
2.2.2. 样品制备 | 第23-24页 |
2.2.3. 一向等电聚焦 | 第24-26页 |
2.2.3.1. 蛋白溶解 | 第24页 |
2.2.3.2. 蛋白定量 | 第24-25页 |
2.2.3.3. 上样液配制 | 第25页 |
2.2.3.4. 胶条泡胀 | 第25页 |
2.2.3.5. 等点聚焦 | 第25页 |
2.2.3.6. 胶条的保存 | 第25-26页 |
2.2.4. 二向电泳(垂直电泳) | 第26-27页 |
2.2.4.1. 灌胶 | 第26页 |
2.2.4.2. 二向实验器具的准备 | 第26页 |
2.2.4.3. 胶条的平衡 | 第26页 |
2.2.4.4. 二向电泳 | 第26-27页 |
2.2.5. 染色 | 第27-28页 |
2.2.5.1. 凝胶转移 | 第27页 |
2.2.5.2. 染色 | 第27-28页 |
2.2.5.3. 凝胶的扫描与保存 | 第28页 |
2.2.6. 图像的分析 | 第28页 |
2.2.7. 质谱(由辉骏生物公司处理) | 第28-30页 |
2.2.7.1. 质谱前处理 | 第28-29页 |
2.2.7.2. 质谱检测 | 第29-30页 |
2.3. 结果与分析 | 第30-39页 |
2.3.1. Bradford法绘制蛋白定量标准曲线 | 第30-31页 |
2.3.2. 卵巢组织切片分期 | 第31-32页 |
2.3.3. 卵巢组织双向电泳图谱及其图谱分析 | 第32-34页 |
2.3.4. 斑节对虾卵巢Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期组织差异蛋白质谱鉴定与分析 | 第34-39页 |
2.4. 讨论 | 第39-47页 |
2.4.1. 双向电泳凝胶图谱的建立 | 第39页 |
2.4.2. 参考图谱质谱鉴别相关蛋白的讨论 | 第39-47页 |
第三章 斑节对虾PmP5CDh、PmGST基因的表达分析 | 第47-54页 |
3.1. 实验材料 | 第47-48页 |
3.1.1. 斑节对虾 | 第47页 |
3.1.2. 主要试剂和仪器 | 第47页 |
3.1.3. 引物 | 第47-48页 |
3.2. 实验方法 | 第48页 |
3.2.1. 斑节对虾RNA的提取及逆转录 | 第48页 |
3.2.2. PmP5CDh和PmGST在斑节对虾各组织中及卵巢不同发育时期的表达分析 | 第48页 |
3.3. 结果与分析 | 第48-51页 |
3.3.1. PmP5CDh和PmGST基因在斑节对虾个组织中的表达分析 | 第48-50页 |
3.3.2. PmP5CDh和PmGST基因在斑节对虾卵巢发育各时期中的表达分析 | 第50-51页 |
3.4. 讨论 | 第51-54页 |
3.4.1. δ-1-吡咯啉-5-羧酸脱氢酶 | 第51-52页 |
3.4.2. 谷胱甘肽硫转移酶 | 第52-54页 |
第四章 斑节对虾泛素融合蛋白UbS27、UbL40 基因的克隆与序列分析 | 第54-73页 |
4.1. 实验材料 | 第54-55页 |
4.1.1. 斑节对虾 | 第54页 |
4.1.2. 主要试剂和仪器 | 第54-55页 |
4.1.3. 引物 | 第55页 |
4.2. 实验方法 | 第55-58页 |
4.2.1. 斑节对虾RNA的提取及逆转录 | 第55-56页 |
4.2.2. RACE获得基因全长 | 第56页 |
4.2.3. 基因克隆 | 第56-57页 |
4.2.4. 序列及系统发生分析 | 第57页 |
4.2.5. UbS27 和UbL40 在斑节对虾各组织中及卵巢不同发育时期的表达分析 | 第57-58页 |
4.3. 结果与分析 | 第58-70页 |
4.3.1. PmUbS27 和PmUbL40 的克隆与cDNA序列分析 | 第58-59页 |
4.3.2. PmUbS27 和PmUbL40 二级结构和三级结构预测 | 第59-61页 |
4.3.3. PmUbS27 和PmUbL40 与其他物种UbL40 序列比对及系统进化树分析 | 第61-67页 |
4.3.4. PmUbS27 和PmUbL40 在不同组织中的表达 | 第67-69页 |
4.3.5. PmUbS27 和PmUbL40 在卵巢发育各期的表达分析 | 第69-70页 |
4.4. 讨论 | 第70-73页 |
小结 | 第73-74页 |
参考文献 | 第74-84页 |
攻读学位期间发表的论文目录 | 第84页 |
参加的学术会议 | 第84-85页 |
致谢 | 第85页 |