| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-22页 |
| 1.1 奶牛乳腺发育及泌乳机制 | 第12-13页 |
| 1.1.1 乳腺发育过程 | 第12页 |
| 1.1.2 泌乳机制 | 第12-13页 |
| 1.2 泌乳信号转导通路 | 第13-18页 |
| 1.2.1 乳蛋白合成及其信号转导通路 | 第14-16页 |
| 1.2.2 乳脂合成及其信号转导通路 | 第16-17页 |
| 1.2.3 mTOR与SREBP1信号转导通路的关联 | 第17-18页 |
| 1.3 GSK3β研究进展 | 第18-20页 |
| 1.3.1 GSK3β的结构和功能 | 第18-19页 |
| 1.3.2 GSK3β相关的信号通路 | 第19-20页 |
| 1.4 研究目的及意义 | 第20-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-43页 |
| 2.1 实验试剂和仪器 | 第22-24页 |
| 2.1.1 实验试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-41页 |
| 2.2.1 奶牛乳腺上皮细胞的培养及鉴定 | 第24-27页 |
| 2.2.2 目的蛋白定位 | 第27页 |
| 2.2.3 目的基因GSK3β基因过表达分析 | 第27-40页 |
| 2.2.4 GSK3β基因抑制分析 | 第40页 |
| 2.2.5 mTOR功能抑制分析 | 第40-41页 |
| 2.2.6 蛋氨酸作用DCMECs | 第41页 |
| 2.3 数据处理 | 第41-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-58页 |
| 3.1 奶牛乳腺上皮细胞的培养及鉴定 | 第43-44页 |
| 3.1.1 DCMECs的原代及传代培养 | 第43页 |
| 3.1.2 DCMECs的鉴定 | 第43-44页 |
| 3.2 目的蛋白定位分析 | 第44-45页 |
| 3.3 GSK3β基因过表达分析 | 第45-50页 |
| 3.3.1 真核表达载体pGCMV-IRES-EGFP-GSK3β的构建 | 第45页 |
| 3.3.2 真核表达载体pGCMV-IRES-EGFP-GSK3β的过表达分析 | 第45-48页 |
| 3.3.3 GSK3β过表达后激光共聚焦验证分析 | 第48-50页 |
| 3.4 GSK3β基因抑制分析 | 第50-53页 |
| 3.4.1 LiCI抑制GSK3β活性 | 第50-52页 |
| 3.4.2 GSK3β活性抑制后激光共聚焦分析 | 第52-53页 |
| 3.5 mTOR功能抑制分析 | 第53-55页 |
| 3.6 Met对DCMECs泌乳的分析 | 第55-58页 |
| 4 讨论 | 第58-63页 |
| 4.1 奶牛乳腺上皮细胞培养、纯化与鉴定分析 | 第58页 |
| 4.2 GSK3β蛋白细胞内定位分析 | 第58-59页 |
| 4.3 GSK3β基因片段在DCMECs中的过表达分析 | 第59页 |
| 4.4 GSK3β抑制mTOR/S6K1信号通路影响奶牛乳腺上皮细胞增殖和乳合成 | 第59-61页 |
| 4.5 mTOR/S6K1信号通路调控GSK3β失活增强奶牛乳腺上皮细胞增殖和乳合成 | 第61-63页 |
| 5 结论 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-73页 |
| 附录 | 第73-76页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第76页 |
