| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 符号说明 | 第10-12页 |
| 综述 | 第12-26页 |
| 第一部分 禽源性大肠杆菌的研究进展 | 第12-19页 |
| 1. 大肠杆菌病概述 | 第12页 |
| 2. 潜在致病因了研究 | 第12-17页 |
| 2.1 禽大肠杆菌的优势血清型 | 第12-13页 |
| 2.2 脂多糖(LPS) | 第13页 |
| 2.3 黏附素(Adhesin) | 第13-15页 |
| 2.3.1 Ⅰ型菌毛黏附素 | 第14页 |
| 2.3.2 P型菌毛黏附素 | 第14-15页 |
| 2.3.3 Curli菌毛黏附素 | 第15页 |
| 2.4 荚膜 | 第15-16页 |
| 2.5 温度敏感性血凝素(temperature-sensitive hemagglutinin,Tsh) | 第16页 |
| 2.6 铁摄取系统 | 第16页 |
| 2.7 外膜蛋白(Outer membrane proteins,OMPs) | 第16-17页 |
| 2.8 侵袭素(IbeA) | 第17页 |
| 3. APEC的致病机理 | 第17-19页 |
| 第二部分 λRed重组技术的应用展望 | 第19-21页 |
| 1. λRed重组系统的作用机制 | 第19-20页 |
| 2. λRed重组系统的应用前景展望 | 第20-21页 |
| 参考文献 | 第21-26页 |
| 前言 | 第26-27页 |
| 1 材料 | 第27-28页 |
| 1.1 囷株和质粒 | 第27页 |
| 1.2 主要试剂 | 第27-28页 |
| 1.3 主要仪器 | 第28页 |
| 1.4 分子生物学及数据分析软件 | 第28页 |
| 1.5 试验鸡 | 第28页 |
| 2 方法 | 第28-37页 |
| 2.1 T-neuC-Cat重组质粒的构建 | 第28-31页 |
| 2.1.1 neuC基因的扩增 | 第28-29页 |
| 2.1.2 neuC基因的克隆 | 第29-30页 |
| 2.1.3 将抗性基因克隆入重组质粒 | 第30-31页 |
| 2.2 E05SAneuC::cat突变株的构建以及？i Red重组系统引入抗性的去除 | 第31-33页 |
| 2.2.1 感受态细胞的制备及转化 | 第31-32页 |
| 2.2.1.1 电转化感受态细胞的制备 | 第31页 |
| 2.2.1.2 质粒pKD46的转化 | 第31-32页 |
| 2.2.1.3 质粒pKD46功能的诱导和感受态细胞的制备 | 第32页 |
| 2.2.1.4 电转化 | 第32页 |
| 2.2.1.5 质粒pKD46的消除 | 第32页 |
| 2.2.2 氯霉素抗性基因的去除 | 第32-33页 |
| 2.2.2.1 质粒pCP20电转入突变株E058△neuC::cat | 第32-33页 |
| 2.2.2.1.1 电转化感受态细胞的制备 | 第32-33页 |
| 2.2.2.1.2 质粒pCP20的转化 | 第33页 |
| 2.2.2.1.3 质粒pCP20的消除 | 第33页 |
| 2.3 RT-PCR | 第33-35页 |
| 2.3.1 细菌RNA的提取 | 第33-34页 |
| 2.3.2 DNA的去除反应 | 第34页 |
| 2.3.3 反转录反应 | 第34页 |
| 2.3.4 cDNA的PCR鉴定 | 第34-35页 |
| 2.4 neuC突变株的回复拯救试验及“意外转录本”的回复拯救试验 | 第35-36页 |
| 2.4.1 neuC完整基因片段及“意外转录本”的扩增 | 第35页 |
| 2.4.2 重组质粒pGEX-6p-1neuC和pGEX-6p-1 neuC'的构建 | 第35页 |
| 2.4.3 电转化受体菌获得回复拯救株 | 第35-36页 |
| 2.5 突变株的生物学特性的研究 | 第36-37页 |
| 2.5.1 细菌生长曲线的测定 | 第36页 |
| 2.5.2 12日龄SPF鸡胚的致死率试验 | 第36页 |
| 2.5.3 1日龄雏鸡致死性试验 | 第36页 |
| 2.5.4 SPF鸡血清的杀菌性实验 | 第36-37页 |
| 2.5.5 HD11细胞的吞噬实验 | 第37页 |
| 2.5.6 体内分布试验 | 第37页 |
| 3 结果 | 第37-49页 |
| 3.1 neuC片段及neuC片段克隆入pMD(?)19-T载体中的鉴定 | 第37-38页 |
| 3.2 Chloramphenicol抗性基因的获得 | 第38页 |
| 3.3 重组质粒T-neuC-Cat的构建 | 第38-39页 |
| 3.4 突变株的构建与鉴定 | 第39-41页 |
| 3.4.1 DNA片段的准备及电转化 | 第39-40页 |
| 3.4.2 突变株E058△neuC::cat的PCR鉴定结果 | 第40页 |
| 3.4.3 去抗性突变株E058△neuC的PCR鉴定结果 | 第40-41页 |
| 3.5 RT-PCR结果 | 第41-43页 |
| 3.5.1 突变株E058△neuC::cat、E058△neuC的RT-PCR鉴定结果 | 第41-43页 |
| 3.5.1.1 突变株E058△neuC::cat的RT-PCR鉴定结果 | 第41-42页 |
| 3.5.1.2 去抗性突变株E058△neuC的RT-PCR鉴定结果 | 第42-43页 |
| 3.6 回复株的构建及鉴定结果 | 第43-44页 |
| 3.7 生长曲线结果 | 第44-45页 |
| 3.7.1 E058及突变株E058△neuC::cat、E058△neuC的生长曲线 | 第44-45页 |
| 3.8 SPF鸡胚的致死率试验结果 | 第45页 |
| 3.9 1日龄雏鸡致死性试验 | 第45-46页 |
| 3.10 血清杀菌试验结果 | 第46页 |
| 3.11 细胞吞噬试验结果 | 第46-47页 |
| 3.12 35日龄SPF鸡体内动态分布试验结果 | 第47-49页 |
| 4 讨论 | 第49-52页 |
| 全文总结 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
