| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-20页 |
| 1.1 Nanog 研究进展 | 第12-15页 |
| 1.1.1 Nanog 基因的发现及其结构 | 第12-13页 |
| 1.1.2 Nanog 生物学意义 | 第13页 |
| 1.1.3 Nanog 表达调控研究进展 | 第13-15页 |
| 1.2 Smads 研究进展 | 第15-18页 |
| 1.2.1 Smad 蛋白家族发现及其结构 | 第15-16页 |
| 1.2.2 Smad 功能研究 | 第16-18页 |
| 1.3 ZEB-2/SIP1 研究进展 | 第18-19页 |
| 1.4 研究目的和意义 | 第19-20页 |
| 第二章 材料与方法 | 第20-39页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第20-24页 |
| 2.1.1 引物 | 第20页 |
| 2.1.2 载体、菌株和细胞 | 第20页 |
| 2.1.3 主要试剂与试剂盒 | 第20-21页 |
| 2.1.4 主要试剂溶液的配置 | 第21-23页 |
| 2.1.5 主要耗材和仪器 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-39页 |
| 2.2.1 技术路线 | 第24页 |
| 2.2.2 牛 Nanog 启动子双荧光素酶报告载体构建 | 第24-32页 |
| 2.2.3 真核表达载体 ZEB-2, Smad1/3/5/8 的构建步骤 | 第32页 |
| 2.2.4 突变载体的构建 | 第32-33页 |
| 2.2.5 细胞培养及转染 | 第33-34页 |
| 2.2.6 双荧光素酶报告基因检测（Dual Luciferase Reporter Assay） | 第34页 |
| 2.2.7 Trizol 裂解法提取 RNA | 第34-35页 |
| 2.2.8 RNA 反转录成 cDNA | 第35页 |
| 2.2.9 实时定量 PCR 验证及数据分析 | 第35-36页 |
| 2.2.10 免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation） | 第36-37页 |
| 2.2.11 蛋白免疫印迹(Western Blot) | 第37-39页 |
| 第三章 结果与分析 | 第39-46页 |
| 3.1 牛成纤维细胞基因组提取结果 | 第39页 |
| 3.2 牛 Nanog 启动子双荧光素酶报告载体构建 | 第39-40页 |
| 3.3 牛 Nanog 启动子双荧光素酶截短报告载体构建 | 第40页 |
| 3.4 牛 Nanog 启动子活性验证 | 第40-41页 |
| 3.5 真核表达载体 ZEB-2, Smad1/3/5/8 的构建 | 第41-42页 |
| 3.6 突变载体构建 | 第42-43页 |
| 3.7 双荧光素酶报告系统检测突变载体活性 | 第43页 |
| 3.8 过表达 ZEB2 检测 Nanog 启动子活性 | 第43-44页 |
| 3.9 过表达 ZEB2、 Smad1、Smad3、Smad8 实时定量检测 Nanog 表达量差异 | 第44-45页 |
| 3.10 免疫共沉淀检测 ZEB2 与 Smad1 相互作用 | 第45-46页 |
| 第四章 讨论与结论 | 第46-48页 |
| 4.1 讨论 | 第46-47页 |
| 4.2 全文结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-50页 |
| 缩略词 | 第50-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 作者简介及在读期间发表的论文 | 第53页 |
