| 摘要 | 第4-5页 |
| 英文摘要 | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第10-16页 |
| 1.1 明串珠菌概述 | 第10-13页 |
| 1.1.1 明串珠菌的特征 | 第10页 |
| 1.1.2 明串珠菌的分类 | 第10页 |
| 1.1.3 明串珠菌的碳代谢 | 第10-12页 |
| 1.1.4 明串珠菌的应用 | 第12页 |
| 1.1.5 明串珠菌的基因工程研究 | 第12-13页 |
| 1.2 基因失活的方法 | 第13-14页 |
| 1.2.1 非复制型（自杀型）载体介导的基因失活 | 第13页 |
| 1.2.2 温度敏感型质粒载体介导的基因失活 | 第13-14页 |
| 1.2.3 线性DNA片段的同源重组 | 第14页 |
| 1.3 研究的目的、可行性和内容 | 第14-16页 |
| 1.3.1 研究的目的意义 | 第14页 |
| 1.3.2 课题研究的可行性 | 第14-15页 |
| 1.3.3 研究内容 | 第15-16页 |
| 第二章 明串珠菌的稳定高效电转化 | 第16-24页 |
| 2.1 实验材料 | 第16-18页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第16-17页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第17页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第17页 |
| 2.1.4 培养基和溶液 | 第17-18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-19页 |
| 2.2.1 提取质粒pCW4 | 第18-19页 |
| 2.2.2 制备明串珠菌感受态细胞 | 第19页 |
| 2.2.3 电击转化 | 第19页 |
| 2.3 实验结果 | 第19-21页 |
| 2.3.1 pCW4质粒的提取 | 第19页 |
| 2.3.2 明串珠菌感受态细胞的制备 | 第19-21页 |
| 2.4 讨论 | 第21-23页 |
| 2.5 小结 | 第23-24页 |
| 第三章 构建明串珠菌的乙酸激酶基因失活菌株 | 第24-42页 |
| 3.1 实验材料 | 第24-26页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第24页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第24-25页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第25-26页 |
| 3.1.4 培养基 | 第26页 |
| 3.2 实验方法 | 第26-34页 |
| 3.2.1 ack基因的克隆 | 第26-29页 |
| 3.2.2 中间载体pTA2 Tet的构建 | 第29-30页 |
| 3.2.3 基因失活载体的构建 | 第30-32页 |
| 3.2.4 明串珠菌的转化 | 第32页 |
| 3.2.5 基因失活菌株的PCR验证 | 第32-33页 |
| 3.2.6 原始菌株和突变菌株发酵生理特性检测 | 第33-34页 |
| 3.3 实验结果 | 第34-39页 |
| 3.3.1 ack基因的克隆与测序分析 | 第34-35页 |
| 3.3.2 中间载体pTA2 Tet的构建 | 第35-36页 |
| 3.3.3 同源重组载体的构建 | 第36-37页 |
| 3.3.4 失活菌株的构建 | 第37页 |
| 3.3.5 失活菌株的PCR验证 | 第37-38页 |
| 3.3.6 失活菌株和原始菌株生理特性比较 | 第38-39页 |
| 3.4 讨论 | 第39-41页 |
| 3.5 小结 | 第41-42页 |
| 第四章 构建明串珠菌的葡聚糖蔗糖酶基因失活菌株 | 第42-54页 |
| 4.1 实验材料 | 第42-43页 |
| 4.1.1 菌株与质粒 | 第42页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第42页 |
| 4.1.3 培养基 | 第42页 |
| 4.1.4 实验仪器 | 第42-43页 |
| 4.2 实验方法 | 第43-46页 |
| 4.2.1 dts基因的克隆 | 第43页 |
| 4.2.2 dts基因上游同源臂dts F和下游同源臂dts B的扩增 | 第43-44页 |
| 4.2.3 重叠延伸PCR | 第44-45页 |
| 4.2.4 基因失活载体的构建 | 第45-46页 |
| 4.2.5 同源重组载体的导入和基因失活菌株的筛选 | 第46页 |
| 4.2.6 原始菌株和突变菌株发酵生理特性检测 | 第46页 |
| 4.3 实验结果 | 第46-51页 |
| 4.3.1 dts基因的克隆与测序分析 | 第46-48页 |
| 4.3.2 dts上、下游同源臂的扩增和重叠延伸 | 第48页 |
| 4.3.3 同源重组载体的构建 | 第48-49页 |
| 4.3.4 同源重组载体的导入与失活菌株的筛选 | 第49页 |
| 4.3.5 原始菌株和突变菌株发酵生理特性检测 | 第49-51页 |
| 4.4 讨论 | 第51-52页 |
| 4.5 小结 | 第52-54页 |
| 第五章 结论 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 附录A | 第62-64页 |
| 附录B | 第64-66页 |
| 致谢 | 第66-68页 |
| 攻读学位期间取得的相关科研成果 | 第68页 |