| 摘要 | 第4-8页 |
| Abstract | 第8-12页 |
| 英文缩略语 | 第13-17页 |
| 第一部分 ：去乙酰化酶SIRT2抑制血管紧张素2诱导的心肌损伤 | 第17-44页 |
| 1 前言 | 第17-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-29页 |
| 2.1 主要试剂和仪器 | 第19-21页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第20-21页 |
| 2.1.3 小鼠、细胞、质粒 | 第21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-29页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第21-22页 |
| 2.2.2 细胞AngⅡ药物干预 | 第22页 |
| 2.2.3 脂质体转染法转染 | 第22页 |
| 2.2.4 慢病毒感染 | 第22-23页 |
| 2.2.5 CCK8分析H9C2的细胞活力 | 第23页 |
| 2.2.6 小鼠高血压心肌损伤模型建立 | 第23-24页 |
| 2.2.7 小鼠血压测量 | 第24页 |
| 2.2.8 小鼠心脏超声分析 | 第24页 |
| 2.2.9 免疫组化Masson染色 | 第24-25页 |
| 2.2.10 蛋白提取 | 第25-26页 |
| 2.2.11 免疫印记 | 第26-28页 |
| 2.2.12 免疫共沉淀与质谱分析 | 第28-29页 |
| 3 结果 | 第29-41页 |
| 3.1 SIRT2对抗AngⅡ诱导的H9C2细胞损伤 | 第29-32页 |
| 3.1.1 AngⅡ诱导的H9C2损伤,增加SIRT2蛋白表达水平 | 第29页 |
| 3.1.2 大鼠心肌细胞shSIRT2片段2具有最高敲减效率 | 第29-30页 |
| 3.1.3 大鼠心肌细胞敲减SIRT2加重的AngⅡ诱导的心肌损伤 | 第30-31页 |
| 3.1.4 大鼠心肌细胞抑制SIRT2活性加重的AngⅡ诱导的心肌损伤 | 第31-32页 |
| 3.2 SIRT2敲除加重AngⅡ诱导的小鼠心肌损伤 | 第32-39页 |
| 3.2.1 SIRT2-KO对AngⅡ诱导的小鼠血压增加无明显作用 | 第32-33页 |
| 3.2.2 SIRT2-KO对AngⅡ诱导的小鼠心率变化无明显作用 | 第33-34页 |
| 3.2.3 SIRT2-KO加重AngⅡ诱导的小鼠心脏/体重比值增加 | 第34-35页 |
| 3.2.4 SIRT2-KO加重AngⅡ诱导的小鼠心脏功能损伤 | 第35-36页 |
| 3.2.5 SIRT2-KO加重AngⅡ诱导的小鼠心脏左室收缩和舒张功能 | 第36-37页 |
| 3.2.6 SIRT2-KO加重AngⅡ诱导的小鼠心肌纤维化 | 第37-38页 |
| 3.2.7 SIRT2-KO加重AngⅡ诱导的小鼠心脏损伤凋亡和纤维化蛋白指标的表达 | 第38-39页 |
| 3.3 质谱分析与SIRT2相互作用的蛋白 | 第39-41页 |
| 4 讨论 | 第41-43页 |
| 5 结论 | 第43-44页 |
| 第二部分 ：Septin4特异性结合PARP1参与氧化应激诱导的血管内皮细胞损伤 | 第44-72页 |
| 1 前言 | 第44-46页 |
| 2 材料与方法 | 第46-57页 |
| 2.1 主要试剂和仪器 | 第46-48页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第46-47页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第47-48页 |
| 2.1.3 小鼠、细胞、质粒 | 第48页 |
| 2.2 实验方法 | 第48-57页 |
| 2.2.1 细胞培养与干预 | 第48页 |
| 2.2.2 蛋白提取 | 第48-49页 |
| 2.2.3 免疫印记 | 第49-51页 |
| 2.2.4 免疫共沉淀 | 第51页 |
| 2.2.5 凋亡流式细胞技术 | 第51页 |
| 2.2.6 脂质体转染法转染 | 第51-52页 |
| 2.2.7 siRNA干扰 | 第52页 |
| 2.2.8 重组质粒的构建 | 第52-55页 |
| 2.2.9 ROS检测 | 第55页 |
| 2.2.10 细胞存活实验 | 第55-57页 |
| 3 结果 | 第57-69页 |
| 3.1 H_2O_2增加Septin4和凋亡通路相关基因的表达,降低细胞活力 | 第57-58页 |
| 3.1.1 随H_2O_2处理浓度增加,HUVEC细胞活性逐渐降低 | 第57页 |
| 3.1.2 H_2O_2显著增加Septin4以及凋亡通路相关基因cleavedcaspase-3和cleavedPARP1表达 | 第57-58页 |
| 3.2 敲减Septin4抑制H_2O_2诱导的HUVEC损伤 | 第58-62页 |
| 3.2.1 HUVEC中Septin4siRNA片段3具有最高敲减效率 | 第58-59页 |
| 3.2.2 HUVEC中敲减Septin4明显缓解H_2O_2诱导的细胞毒性 | 第59页 |
| 3.2.3 敲减Septin4明显缓解H_2O_2诱导的HUVEC凋亡 | 第59-60页 |
| 3.2.4 敲减Septin4明显缓解H_2O_2诱导的HUVEC凋亡相关蛋白cleavedcaspase-3和cleavedPARP1表达 | 第60-61页 |
| 3.2.5 HUVEC中敲减Septin4明显缓解H_2O_2诱导的ROS产生 | 第61-62页 |
| 3.3 HUVEC过表达Septin4加重H_2O_2诱导的HUVEC损伤 | 第62-66页 |
| 3.3.1 HUVEC中过表达Septin4明显加重H_2O_2诱导的细胞毒性 | 第62-63页 |
| 3.3.2 过表达Flag-Septin4明显加重H_2O_2诱导的HUVEC凋亡 | 第63-64页 |
| 3.3.3 过表达Flag-Septin4明显加重H_2O_2诱导的HUVEC凋亡相关蛋白cleavedcaspase-3和cleavedPARP1表达 | 第64-65页 |
| 3.3.4 HUVEC中过表达Septin4明显加重H_2O_2诱导的ROS产生 | 第65-66页 |
| 3.4 HUVEC中Septin4与凋亡相关因子PARP1相互作用 | 第66-69页 |
| 3.4.1 內源免疫共沉淀证实Septin4与PARP1相互作用 | 第66-67页 |
| 3.4.2 內源免疫共沉淀实验证明,在H_2O_2刺激下,Septin4与PARP1结合水平增强 | 第67-69页 |
| 4 讨论 | 第69-71页 |
| 5 结论 | 第71-72页 |
| 本研究创新性自我评价 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-78页 |
| 综述一 | 第78-88页 |
| 参考文献 | 第83-88页 |
| 综述二 | 第88-98页 |
| 参考文献 | 第94-98页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第98-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 个人简介 | 第100页 |
