| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 缩写表 | 第9-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-21页 |
| 1.1 赖氨酸可逆乙酰化 | 第10-16页 |
| 1.1.1 乙酰化简介 | 第10页 |
| 1.1.2 乙酰化重要生理作用 | 第10-13页 |
| 1.1.3 Gcn5相关N-乙酰转移酶 | 第13-15页 |
| 1.1.4 小分子变构调控乙酰转移酶机制研究 | 第15-16页 |
| 1.2 氨基酸结合结构域ACT | 第16-20页 |
| 1.2.1 ACT结构域背景介绍 | 第16-17页 |
| 1.2.2 氨基酸结合位点 | 第17-18页 |
| 1.2.3 ACT结构域的变构调控机制 | 第18-20页 |
| 1.3 本课题研究目的与意义 | 第20-21页 |
| 第2章 氨基酸变构调控ACT-GNAT乙酰转移酶活性 | 第21-44页 |
| 2.1 前言 | 第21页 |
| 2.2 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.2.1 菌株及质粒 | 第21-22页 |
| 2.2.2 实验试剂和酶 | 第22页 |
| 2.2.3 实验常用仪器 | 第22-23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-31页 |
| 2.3.1 目的基因扩增 | 第23-25页 |
| 2.3.2 高纯度pET-28a(+)质粒小量抽提 | 第25-26页 |
| 2.3.3 目的基因和载体的同源重组 | 第26-28页 |
| 2.3.4 基因工程菌构建 | 第28-29页 |
| 2.3.5 PatA蛋白酶的诱导表达及纯化 | 第29-30页 |
| 2.3.6 氨基酸调控小分子的筛选及体外变构调控机制研究 | 第30-31页 |
| 2.4 实验结果与分析 | 第31-42页 |
| 2.4.1 ACT-GNAT型N-乙酰转移酶菌种分析 | 第31-36页 |
| 2.4.2 目的PatA蛋白生物信息学分析 | 第36-39页 |
| 2.4.3 PatA蛋白的获取 | 第39-41页 |
| 2.4.4 氨基酸小分子筛选 | 第41-42页 |
| 2.5 讨论与总结 | 第42-44页 |
| 2.5.1 讨论 | 第42-43页 |
| 2.5.2 实验小结 | 第43-44页 |
| 第3章 半胱氨酸变构调控奇迹束丝放线菌Gcn5相关N-乙酰转移酶 | 第44-60页 |
| 3.1 引言 | 第44-45页 |
| 3.2 实验材料 | 第45-46页 |
| 3.2.1 实验试剂 | 第45页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第45-46页 |
| 3.3 实验方法 | 第46-51页 |
| 3.3.1 AmiPatA活性及变构机制测定 | 第46-48页 |
| 3.3.2 体外Acs活性检测 | 第48-49页 |
| 3.3.3 圆二色谱法测定AmiPatA二级结构 | 第49页 |
| 3.3.4 微热量泳动仪测定Cys与AmiPatA结合常数 | 第49-50页 |
| 3.3.5 AmiAcs及AmiPatA定点突变 | 第50-51页 |
| 3.3.6 质谱鉴定AmiAcs乙酰化位点 | 第51页 |
| 3.3.7 实验数据的处理 | 第51页 |
| 3.4 实验结果 | 第51-59页 |
| 3.4.1 AmiPatA乙酰化AmiAcs | 第51-52页 |
| 3.4.2 乙酰化的AmiAcs活性测定 | 第52-53页 |
| 3.4.3 AmiPatA的调控小分子为Cys | 第53-55页 |
| 3.4.4 Cys变构调控AmiPatA活性 | 第55-57页 |
| 3.4.5 AmiPatA动力学参数测定 | 第57页 |
| 3.4.6 Cys与ACT结构域结合位点分析 | 第57-59页 |
| 3.5 讨论及结论 | 第59-60页 |
| 3.5.1 讨论 | 第59页 |
| 3.5.2 结论 | 第59-60页 |
| 第4章 总结与展望 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-70页 |
| 论文发表 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
