| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 前言 | 第11-26页 |
| 1 MAPK信号通路简介及其主要功能 | 第11-19页 |
| 1.1 MAPK信号通路简介 | 第11-12页 |
| 1.2 MAPKs家族蛋白的结构及功能 | 第12-15页 |
| 1.3 MAPK信号级联亚通路及其功能 | 第15-19页 |
| 2 硫化物的来源和在生物体内的作用 | 第19-21页 |
| 2.1 水体中外源硫化物的来源以及对生物的毒性 | 第19-20页 |
| 2.2 内源硫化物的合成和代谢以及其作用 | 第20-21页 |
| 3 硫化氢与MAPK信号通路 | 第21-22页 |
| 4 单环刺螠生物学特征及其耐受硫化物的研究进展 | 第22-24页 |
| 4.1 单环刺螠生物学特征 | 第22-23页 |
| 4.2 单环刺螠硫化物耐受机制的相关研究 | 第23-24页 |
| 5 论文研究意义 | 第24-26页 |
| 第二章 单环刺螠MAPKs信号通路关键因子基因的克隆与生物信息学分析 | 第26-40页 |
| 1 材料与方法 | 第26-33页 |
| 1.1 材料 | 第26-27页 |
| 1.1.1 实验动物 | 第26页 |
| 1.1.2 试剂盒、工具酶和引物 | 第26-27页 |
| 1.2 实验方法 | 第27-33页 |
| 1.2.1 单环刺螠呼吸肠总RNA的提取 | 第27-28页 |
| 1.2.1.1 实验前期准备 | 第27页 |
| 1.2.1.2 Trizol法提取RNA | 第27-28页 |
| 1.2.2 RACE扩增JNK和p38的全长序列 | 第28-31页 |
| 1.2.3 部分ERK cDNA部分序列的获取 | 第31-32页 |
| (1) 合成第一链cDNA | 第31-32页 |
| 1.2.4 ERK、JNK、p38的生物信息学分析 | 第32-33页 |
| 2 实验结果 | 第33-38页 |
| 2.1 单环刺螠JNK全长cDNA序列的获得和特征分析 | 第33-35页 |
| 2.2 单环刺螠p38全长cDNA序列的获得和特征分析 | 第35-36页 |
| 2.3 单环刺螠ERK的序列特征分析 | 第36-38页 |
| 3 讨论 | 第38-40页 |
| 第三章 单环刺螠硫化物应激下MAPKs通路的反应 | 第40-57页 |
| 1 实验材料及方法 | 第41-49页 |
| 1.1 实验材料 | 第41-42页 |
| 1.1.1 实验动物及样本制备 | 第41页 |
| 1.1.2 实验材料 | 第41-42页 |
| 1.2 实验方法 | 第42-49页 |
| 1.2.1 单环刺螠JNK、p38原核表达载体的构建 | 第42-44页 |
| 1.2.2 单环刺螠JNK和p38重组蛋白的原核表达 | 第44-45页 |
| 1.2.3 重组蛋白表达条件的优化 | 第45页 |
| 1.2.4 目的重组包涵体蛋白的纯化 | 第45页 |
| 1.2.5 JNK和p38多克隆抗体的制备和效价检测 | 第45-46页 |
| 1.2.6 多克隆抗体的特异性检测 | 第46-47页 |
| 1.2.7 JNK、p38、ERK磷酸化单克隆抗体的选择及购买 | 第47页 |
| 1.2.8 Western blot检测 | 第47-48页 |
| 1.2.9 实验数据的处理 | 第48-49页 |
| 2 实验结果 | 第49-54页 |
| 2.1 目的基因体外重组蛋白的表达和纯化 | 第49-50页 |
| 2.2 多克隆抗体的效价和特异性检测 | 第50-51页 |
| 2.3 JNK在硫化物暴露下的单环刺螠呼吸肠细胞中被长效激活 | 第51-52页 |
| 2.4 p38在单环刺螠硫化物暴露下的呼吸肠细胞中表达量瞬间升高 | 第52-53页 |
| 2.5 ERK在单环刺螠硫化物暴露下的呼吸肠细胞中被瞬时激活 | 第53-54页 |
| 3 讨论 | 第54-57页 |
| 3.1 JNK信号通路是单环刺螠呼吸肠应对硫化物暴露的主要MAPKs通路 | 第55页 |
| 3.2 ERK的瞬时激活可能与细胞存活相关 | 第55-56页 |
| 3.3 JNK和ERK信号通路之间的平衡决定细胞的命运 | 第56-57页 |
| 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 个人简历 | 第69页 |
| 发表的学术论文 | 第69页 |
