| 摘要 | 第12-14页 |
| Abstract | 第14-15页 |
| 第一章 前言 | 第16-26页 |
| 1.1 昆虫先天性免疫 | 第16-20页 |
| 1.1.1 血细胞 | 第16页 |
| 1.1.2 识别蛋白 | 第16-18页 |
| 1.1.3 抗菌肽 | 第18-19页 |
| 1.1.4 信号转导 | 第19-20页 |
| 1.2 蛋白酶抑制剂 | 第20-24页 |
| 1.2.1 Serpin | 第20-22页 |
| 1.2.2 昆虫serpins研究进展 | 第22-24页 |
| 1.3 本研究目的及意义 | 第24-25页 |
| 1.4 技术路线 | 第25-26页 |
| 第二章 Apserpin-6基因的分子克隆及序列分析 | 第26-40页 |
| 2.1 试验材料 | 第26页 |
| 2.2 仪器与试剂 | 第26-28页 |
| 2.2.1 主要仪器设备 | 第26-27页 |
| 2.2.2 试验试剂 | 第27页 |
| 2.2.3 常用溶液的配制 | 第27-28页 |
| 2.3 试验方法 | 第28-35页 |
| 2.3.1 柞蚕饲养 | 第28页 |
| 2.3.2 柞蚕总RNA的提取 | 第28-29页 |
| 2.3.3 柞蚕cDNA的合成 | 第29页 |
| 2.3.4 引物设计 | 第29页 |
| 2.3.5 目的片段的PCR扩增 | 第29-30页 |
| 2.3.6 PCR产物的纯化 | 第30页 |
| 2.3.7 感受态细胞的制备 | 第30-31页 |
| 2.3.8 目的片段的连接转化 | 第31页 |
| 2.3.9 生物信息学分析 | 第31-35页 |
| 2.4 结果与分析 | 第35-40页 |
| 2.4.1 柞蚕总RNA的检测 | 第35-36页 |
| 2.4.2 PCR产物的检测 | 第36页 |
| 2.4.3 柞蚕serpin基因的序列特征 | 第36-37页 |
| 2.4.4 Serpins多重序列比对及系统进化分析 | 第37-40页 |
| 第三章 Apserpin-6基因的组织表达谱及病原诱导表达模式分析 | 第40-46页 |
| 3.1 试验材料 | 第40页 |
| 3.2 仪器与试剂 | 第40页 |
| 3.2.1 主要仪器设备 | 第40页 |
| 3.2.2 试验试剂 | 第40页 |
| 3.3 试验方法 | 第40-44页 |
| 3.3.1 病原微生物的诱导 | 第40-41页 |
| 3.3.2 柞蚕各组织的收集 | 第41页 |
| 3.3.3 柞蚕各组织RNA的提取及cDNA制备 | 第41页 |
| 3.3.4 引物设计 | 第41-42页 |
| 3.3.5 半定量RT-PCR检测目的基因的组织表达谱 | 第42-43页 |
| 3.3.6 定量RT-PCR检测病原物诱导柞蚕血淋巴中目的基因表达情况 | 第43页 |
| 3.3.7 数据分析 | 第43-44页 |
| 3.4 结果与分析 | 第44-46页 |
| 3.4.1 Apserpin-6基因的组织表达谱 | 第44页 |
| 3.4.2 病原微生物诱导Apserpin-6基因表达情况 | 第44-46页 |
| 第四章 Apserpin-6基因原核表达及重组蛋白纯化 | 第46-54页 |
| 4.1 试验材料 | 第46页 |
| 4.2 仪器与试剂 | 第46-48页 |
| 4.2.1 主要仪器设备 | 第46页 |
| 4.2.2 试验试剂 | 第46页 |
| 4.2.3 常用溶液的配制 | 第46-48页 |
| 4.3 试验方法 | 第48-51页 |
| 4.3.1 引物设计 | 第48页 |
| 4.3.2 目的片段的PCR扩增和纯化 | 第48-49页 |
| 4.3.3 目的片段连接和转化 | 第49页 |
| 4.3.4 重组质粒抽提和转化 | 第49页 |
| 4.3.5 IPTG诱导重组蛋白表达 | 第49-50页 |
| 4.3.6 重组蛋白纯化 | 第50页 |
| 4.3.7 重组蛋白的WesternBlot | 第50-51页 |
| 4.4 结果与分析 | 第51-54页 |
| 4.4.1 PCR产物的检测 | 第51页 |
| 4.4.2 原核表达载体构建 | 第51-52页 |
| 4.4.3 IPTG诱导表达产物检测 | 第52页 |
| 4.4.4 WesternBlot验证 | 第52-54页 |
| 第五章 重组Apserpin-6蛋白体外活性研究 | 第54-57页 |
| 5.1 试验材料 | 第54页 |
| 5.2 仪器与试剂 | 第54页 |
| 5.2.1 主要仪器设备 | 第54页 |
| 5.2.2 常用溶液的配制 | 第54页 |
| 5.3 试验方法 | 第54-55页 |
| 5.3.1 柞蚕幼虫血淋巴的收集与筛选 | 第54页 |
| 5.3.2 重组Apserpin-6对柞蚕幼虫血淋巴proPO活化抑制作用的检测 | 第54-55页 |
| 5.3.3 重组Apserpin-6对柞蚕幼虫血淋巴PO活性抑制作用的检测 | 第55页 |
| 5.4 结果与分析 | 第55-57页 |
| 5.4.1 重组Apserpin-6抑制柞蚕幼虫血淋巴proPO的活化 | 第55页 |
| 5.4.2 重组Apserpin-6不抑制柞蚕幼虫血淋巴PO活性 | 第55-57页 |
| 第六章 讨论与结论 | 第57-60页 |
| 参考文献 | 第60-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 攻读硕士学位期间发表文章 | 第73-74页 |
