| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第1章 绪论 | 第14-39页 |
| 1.1 氧化葡萄糖酸杆菌 | 第14-27页 |
| 1.1.1 氧化葡萄糖酸杆菌的基本特征 | 第14-16页 |
| 1.1.2 G.oxydans的基因组特征 | 第16-17页 |
| 1.1.3 G.oxydans的呼吸链 | 第17-18页 |
| 1.1.4 G.oxydans的多元醇脱氢酶 | 第18-21页 |
| 1.1.5 氧化葡萄糖酸杆菌的应用 | 第21-27页 |
| 1.2 2-酮基-D-葡萄糖酸简介 | 第27-32页 |
| 1.2.1 2KGA物理和化学特性 | 第27-28页 |
| 1.2.2 2KGA的用途 | 第28页 |
| 1.2.3 2KGA的合成方法简介 | 第28-29页 |
| 1.2.4 生物发酵法合成2KGA研究进展 | 第29-31页 |
| 1.2.5 静息细胞催化法生产2KGA研究进展 | 第31-32页 |
| 1.3 葡萄糖酸简介 | 第32-37页 |
| 1.3.1 GA的基本特性 | 第32-33页 |
| 1.3.2 GA及其衍生品的主要用途 | 第33-34页 |
| 1.3.3 葡萄糖酸(盐)生产方法简介 | 第34-35页 |
| 1.3.4 生物发酵法生产GA的研究进展 | 第35-36页 |
| 1.3.5 国内外GA发酵生产现状及存在的主要问题 | 第36-37页 |
| 1.4 本论文选题依据及主要研究内容 | 第37-39页 |
| 1.4.1 研究目的与意义 | 第37页 |
| 1.4.2 本论文的选题依据及研究内容 | 第37-39页 |
| 第2章 高产2-酮基-D-葡萄糖酸的氧化葡萄糖酸杆菌菌株的构建 | 第39-60页 |
| 2.1 引言 | 第39页 |
| 2.2 材料与设备 | 第39-43页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第39-42页 |
| 2.2.2 培养基及抗生素 | 第42页 |
| 2.2.3 实验仪器设备 | 第42-43页 |
| 2.3 实验方法 | 第43-52页 |
| 2.3.1 G. oxydans基因组的提取、DH5α质粒提取及DNA回收 | 第43-44页 |
| 2.3.2 ga2dh基因的PCR扩增 | 第44页 |
| 2.3.3 DNA双酶切 | 第44-45页 |
| 2.3.4 DNA片段的连接 | 第45页 |
| 2.3.5 大肠杆菌的转化 | 第45页 |
| 2.3.6 大肠杆菌转化子的鉴定 | 第45-46页 |
| 2.3.7 重组菌株的接合转化 | 第46页 |
| 2.3.8 G. oxydans的培养与静息细胞的收集 | 第46-47页 |
| 2.3.9 G. oxydans催化生成2KGA的活力测定 | 第47页 |
| 2.3.10 GA,2KGA浓度的检测 | 第47-49页 |
| 2.3.11 G.oxydans RNA的提取 | 第49-50页 |
| 2.3.12 G.oxydans RNA反转录 | 第50-51页 |
| 2.3.13 荧光定量PCR检测 | 第51-52页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第52-59页 |
| 2.4.1 含ga2dh基因的质粒的构建 | 第52页 |
| 2.4.2 三亲本接合法构建过表达ga2dh的G. oxydans DSM 2003 | 第52页 |
| 2.4.3 过表达菌株催化效率的比较 | 第52-53页 |
| 2.4.4 G.oxydans_tufB_ga2dh与对照菌株中ga2dh基因转录水平的比较 | 第53-59页 |
| 2.5 本章小结 | 第59-60页 |
| 第3章 G. oxydans_tufB_ga2dh催化葡萄糖酸生成2KGA的过程研究 | 第60-74页 |
| 3.1 引言 | 第60页 |
| 3.2 材料与设备 | 第60-62页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第60-61页 |
| 3.2.2 主要仪器设备 | 第61-62页 |
| 3.3 实验方法 | 第62-63页 |
| 3.3.1 菌体的培养与收集 | 第62页 |
| 3.3.2 静息细胞催化GA | 第62页 |
| 3.3.3 GA和2KGA的测定 | 第62页 |
| 3.3.4 2KGA的分离纯化 | 第62-63页 |
| 3.3.5 实验流程 | 第63页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第63-72页 |
| 3.4.1 过表达菌株与原始菌株催化GA能力的比较 | 第63页 |
| 3.4.2 不同G. oxydans_tufB_ga2dh细胞浓度对催化GA反应的影响 | 第63-66页 |
| 3.4.3 不同GA浓度对G. oxydans_tufB_ga2dh催化反应的影响 | 第66-68页 |
| 3.4.4 不同底物浓度的催化反应中溶氧的变化 | 第68-69页 |
| 3.4.5 氧气对G.oxydans_tufB_ga2dh催化GA反应的影响 | 第69-71页 |
| 3.4.6 2KGA的分离纯化 | 第71-72页 |
| 3.5 本章小结 | 第72-74页 |
| 第4章 G. oxydans_tufB_ga2dh催化葡萄糖生成2KGA的研究 | 第74-94页 |
| 4.1 引言 | 第74页 |
| 4.2 材料与设备 | 第74-75页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第74-75页 |
| 4.2.2 主要仪器设备 | 第75页 |
| 4.3 实验方法 | 第75-77页 |
| 4.3.1 菌体的培养与收集 | 第75页 |
| 4.3.2 静息细胞催化葡萄糖 | 第75-76页 |
| 4.3.3 GA和2KGA的测定 | 第76页 |
| 4.3.4 葡萄糖浓度测定 | 第76-77页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第77-93页 |
| 4.4.1 过表达菌株与原始菌株催化葡萄糖能力的比较 | 第77-78页 |
| 4.4.2 细胞浓度对G. oxydans_tufB_ga2dh催化葡萄糖反应的影响 | 第78-80页 |
| 4.4.3 底物浓度对催化葡萄糖能力的影响 | 第80-82页 |
| 4.4.4 补料方式对静息细胞催化的影响 | 第82-86页 |
| 4.4.5 氧气对G.oxydans_tufB_ga2dh催化葡萄糖反应的影响 | 第86-90页 |
| 4.4.6 2KGA生产的相关研究 | 第90-93页 |
| 4.5 本章小结 | 第93-94页 |
| 第5章 高产葡萄糖酸的氧化葡萄糖酸杆菌工程菌株的构建 | 第94-106页 |
| 5.1 前言 | 第94-95页 |
| 5.2 材料与方法 | 第95-98页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第95-97页 |
| 5.2.2 培养基及抗生素 | 第97页 |
| 5.2.3 实验仪器设备 | 第97-98页 |
| 5.3 实验方法 | 第98-99页 |
| 5.3.1 基因组提取、质粒提取及DNA回收 | 第98页 |
| 5.3.2 gdh基因的PCR扩增 | 第98页 |
| 5.3.3 DNA片段的双酶切 | 第98页 |
| 5.3.4 DNA片段的连接 | 第98页 |
| 5.3.5 大肠杆菌的转化 | 第98-99页 |
| 5.3.6 大肠杆菌转化子的鉴定 | 第99页 |
| 5.3.7 接合转化氧化G.oxydans | 第99页 |
| 5.3.8 氧化葡萄糖酸杆菌的培养 | 第99页 |
| 5.3.9 静息细胞的收集 | 第99页 |
| 5.3.10 G.oxydans催化葡萄糖生成GA | 第99页 |
| 5.3.11 GA和2KGA浓度的测定 | 第99页 |
| 5.3.12 葡萄糖浓度测定 | 第99页 |
| 5.3.13 GA的选择率的计算 | 第99页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第99-104页 |
| 5.4.1 过表达GDH的G.oxydans重组菌株的构建 | 第99-100页 |
| 5.4.2 不同过表达菌株与原始菌株催化葡萄糖生成GA能力的比较 | 第100-101页 |
| 5.4.3 底物浓度对G.oxydans | 第101页 |
| 5.4.4 G.oxydans | 第101-103页 |
| 5.4.5 补料分批催化葡萄糖合成GA | 第103页 |
| 5.4.6 GA生产的相关研究 | 第103-104页 |
| 5.5 本章小结 | 第104-106页 |
| 第6章 结论与展望 | 第106-108页 |
| 6.1 结论 | 第106-107页 |
| 6.2 展望 | 第107-108页 |
| 参考文献 | 第108-121页 |
| 致谢 | 第121-122页 |
| 在攻读博士学位期间撰写发表的论文与专利 | 第122页 |
