| 致谢 | 第7-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10页 |
| 目录 | 第11-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-22页 |
| 1 稻瘟病与稻瘟病菌 | 第14-18页 |
| 1.1 稻瘟病菌的侵染循环 | 第14-18页 |
| 1.1.1 孢子萌发 | 第15-16页 |
| 1.1.2 附着胞的形成和成熟 | 第16页 |
| 1.1.3 侵入栓的形成和侵入 | 第16-17页 |
| 1.1.4 侵染菌丝的分化和扩展 | 第17页 |
| 1.1.5 产孢与再侵染 | 第17-18页 |
| 2 活性氧与植物病原真菌 | 第18-20页 |
| 2.1 活性氧的种类 | 第18页 |
| 2.2 活性氧的产生途径 | 第18页 |
| 2.3 活性氧的清除机制 | 第18-19页 |
| 2.4 活性氧在细胞凋亡过程中的作用 | 第19页 |
| 2.5 活性氧在丝状病原真菌致病过程中的作用 | 第19-20页 |
| 3 本研究的目的和意义 | 第20-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-46页 |
| 1 试验材料 | 第22-26页 |
| 1.1 试验菌株 | 第22页 |
| 1.2 供试植物 | 第22页 |
| 1.3 质粒载体 | 第22页 |
| 1.4 文库 | 第22页 |
| 1.5 试剂 | 第22-23页 |
| 1.6 仪器 | 第23页 |
| 1.7 培养基 | 第23-26页 |
| 1.7.1 大肠杆菌培养基 | 第23-24页 |
| 1.7.2 稻瘟病菌培养基 | 第24-26页 |
| 1.7.3 农杆菌诱导培养基(Agrobacterium tumefaciens InducedMedium,AIM) | 第26页 |
| 2 试验方法 | 第26-46页 |
| 2.1 PCR | 第26-29页 |
| 2.1.1 常规PCR | 第27页 |
| 2.1.2 LD-PCR(长距离PCR) | 第27-28页 |
| 2.1.3 RT-PCR和qRT-PCR | 第28-29页 |
| 2.2 质粒提取 | 第29-30页 |
| 2.2.1 小量质粒DNA的提取 | 第29页 |
| 2.2.2 中量质粒DNA的提取 | 第29-30页 |
| 2.3 DNA分析 | 第30-32页 |
| 2.3.1 琼脂糖凝胶电泳 | 第30-31页 |
| 2.3.2 DNA片段的凝胶回收 | 第31页 |
| 2.3.3 DNA酶切 | 第31-32页 |
| 2.3.4 酶切片段的去磷酸化(CIP) | 第32页 |
| 2.3.5 连接反应 | 第32页 |
| 2.4 遗传转化 | 第32-35页 |
| 2.4.1 E.coli DH5α感受态细胞的制备及转化 | 第32-34页 |
| 2.4.2 农杆菌的冻融法转化 | 第34-35页 |
| 2.4.3 稻瘟病菌的农杆菌介导转化方法(ATMT) | 第35页 |
| 2.5 基因组DNA操作 | 第35-43页 |
| 2.5.1 稻瘟病菌基因组DNA的小量提取(用于转化子的PCR验证) | 第35-36页 |
| 2.5.2 稻瘟病菌基因组DNA的大量提取(用于转化子的Southern杂交验证) | 第36-37页 |
| 2.5.3 稻瘟病菌基因组DNA Southern杂交(DIG) | 第37-42页 |
| 2.5.4 稻瘟病菌RNA的提取和分析 | 第42-43页 |
| 2.6 稻瘟病菌生物学及侵染过程病理学观察 | 第43-46页 |
| 2.6.1 菌株的保存与培养 | 第43页 |
| 2.6.2 菌落生长速度、产孢量测定以及附着孢的形成 | 第43-44页 |
| 2.6.3 稻瘟病菌的有性杂交 | 第44页 |
| 2.6.4 大麦离体接种 | 第44页 |
| 2.6.5 水稻喷雾接种 | 第44-46页 |
| 第三章 MoSOK1基因的克隆与功能分析 | 第46-57页 |
| 3.1 MoSOK1基因的序列分析 | 第46页 |
| 3.2 MoSOK1基因缺失突变体的获得 | 第46-50页 |
| 3.2.1 敲除载体构建的策略 | 第46-47页 |
| 3.2.2 Δmosok1突变体的获得 | 第47-49页 |
| 3.2.3 RT-PCR和qRT-PCR | 第49-50页 |
| 3.3 突变体Δmosok1表型分析 | 第50-53页 |
| 3.3.1 Δmosok1的菌落形态 | 第50-51页 |
| 3.3.2 Δmosok1的生长速度 | 第51-52页 |
| 3.3.3 Δmosok1的产孢量 | 第52页 |
| 3.3.4 Δmosok1的孢子萌发和附着胞形成 | 第52-53页 |
| 3.3.5 交配试验 | 第53页 |
| 3.4 突变体Δmosok1致病性 | 第53-55页 |
| 3.4.1 离体接种 | 第53-54页 |
| 3.4.2 喷雾接种 | 第54-55页 |
| 3.5 MoSOK1基因在细胞内的空间分布 | 第55-57页 |
| 3.5.1 融合载体的构建 | 第55-56页 |
| 3.5.2 荧光观察 | 第56-57页 |
| 第四章 MoSOD1和MoSOD2基因的克隆与功能分析 | 第57-72页 |
| 4.1 MoSOD1基因的序列分析 | 第57页 |
| 4.2 MoSOD1和MoSOD2基因缺失突变体的获得 | 第57-65页 |
| 4.2.1 敲除载体构建的策略 | 第57-59页 |
| 4.2.2 Δmosod1、Δmosod2和Δmosod1mosod2突变体的获得 | 第59-62页 |
| 4.2.3 RT-PCR和qRT-PCR | 第62-65页 |
| 4.3 突变体Δmosod1、Δmosod2和Δmosod1mosod2的表型分析 | 第65-67页 |
| 4.3.1 突变体的菌落形态 | 第65页 |
| 4.3.2 突变体的生长速度 | 第65-66页 |
| 4.3.3 突变体的产孢量 | 第66-67页 |
| 4.3.4 交配试验 | 第67页 |
| 4.4 SODs突变体对各离子的敏感性测定 | 第67-70页 |
| 4.4.1 对H_2O_2的敏感性测定 | 第67-68页 |
| 4.4.2 对ZnSO_4的敏感性测定 | 第68-69页 |
| 4.4.3 对CuSO_4的敏感性测定 | 第69-70页 |
| 4.5 突变体的致病性分析 | 第70-72页 |
| 4.5.1 离体接种 | 第70-71页 |
| 4.5.2 喷雾接种 | 第71-72页 |
| 第五章 讨论与总结 | 第72-75页 |
| 参考文献 | 第75-79页 |
| 附录 | 第79页 |
