| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一章 绪论 | 第14-47页 |
| 1.1 真菌感染与抗菌化合物的研究 | 第14-27页 |
| 1.1.1 真菌感染 | 第14页 |
| 1.1.2 典型的真菌致病菌 | 第14-16页 |
| 1.1.3 新型抗真菌药物的迫切需要 | 第16-18页 |
| 1.1.4 新型抗真菌抗生素的来源 | 第18-22页 |
| 1.1.5 芽孢杆菌抗菌代谢产物的研究进展 | 第22-27页 |
| 1.2 Bacilysin的研究进展 | 第27-35页 |
| 1.2.1 Bacilysin的发现 | 第27-28页 |
| 1.2.2 Bacilysin的生物合成 | 第28-30页 |
| 1.2.3 Bacilysin生物合成途径的调控方式 | 第30-32页 |
| 1.2.4 Bacilysin类化合物的作用机理 | 第32-33页 |
| 1.2.6 Bacilysin主要的发展限制因素 | 第33-35页 |
| 1.3 新型小分子肽类化合物的研发 | 第35-38页 |
| 1.3.1 小分子肽类化合物的优势与不足 | 第35-37页 |
| 1.3.2 小分子肽类化合物的研发方向 | 第37-38页 |
| 1.4 计算机辅助药物设计在新药创制中的应用 | 第38-45页 |
| 1.4.1 虚拟筛选在筛选先导化合物中的应用 | 第39-42页 |
| 1.4.2 基于结构的药物设计 | 第42-45页 |
| 1.5 本课题的研究思路与主要内容 | 第45-47页 |
| 1.5.1 研究思路 | 第45页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第45-47页 |
| 第二章 抗生素生产菌株的筛选及罐上发酵优化 | 第47-61页 |
| 2.1 前言 | 第47页 |
| 2.2 材料和方法 | 第47-49页 |
| 2.2.1 菌种 | 第47页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第47-48页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第48-49页 |
| 2.2.4 培养基 | 第49页 |
| 2.3 实验方法 | 第49-53页 |
| 2.3.1 发酵过程中糖、菌体量以及抗真菌药物效价的测定方法 | 第49页 |
| 2.3.2 抗生素标准曲线的绘制 | 第49-50页 |
| 2.3.3 抗生素生产菌株的鉴定 | 第50-52页 |
| 2.3.4 5L发酵罐发酵生产抗生素的单因素优化 | 第52页 |
| 2.3.5 5L发酵罐发酵生产抗生素 | 第52页 |
| 2.3.6 抗生素中试发酵工艺 | 第52-53页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第53-59页 |
| 2.4.1 制霉菌素标准曲线的绘制 | 第53-54页 |
| 2.4.2 抗生素生产菌株的鉴定 | 第54-55页 |
| 2.4.3 发酵罐发酵生产抗生素的单因素优化方法 | 第55-56页 |
| 2.4.4 5L发酵罐发酵生产抗生素 | 第56-57页 |
| 2.4.5 抗生素发酵的工艺放大 | 第57-59页 |
| 2.5 本章小结 | 第59-61页 |
| 第三章 抗真菌代谢产物的分离纯化与结构鉴定 | 第61-79页 |
| 3.1 前言 | 第61页 |
| 3.2 实验仪器与材料 | 第61-62页 |
| 3.3 实验方法 | 第62-66页 |
| 3.3.1 抗真菌化合物的分离与鉴定 | 第62-64页 |
| 3.3.1.1 抗真菌有效组分的极性确定 | 第62页 |
| 3.3.1.2 抗真菌组分的分离提取 | 第62-64页 |
| 3.3.1.3 抗真菌组分的结构解析 | 第64页 |
| 3.3.2 Bacilysin的大规模分离提取工艺研究 | 第64-66页 |
| 3.3.2.1 Bacilysin标准曲线的建立 | 第65页 |
| 3.3.2.2 纳滤膜过滤浓缩发酵液 | 第65页 |
| 3.3.2.2 Bacilysin吸附树脂的工艺优化 | 第65-66页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第66-78页 |
| 3.4.1 抗真菌活性物质的分离与鉴定 | 第66-74页 |
| 3.4.1.1 抗真菌活性物质的极性确定 | 第66页 |
| 3.4.1.2 Bacilysin的分离提取与结构鉴定 | 第66-74页 |
| 3.4.2 Bacilysin的大规模制备工艺研究 | 第74-78页 |
| 3.4.2.1 Bacilysin标准曲线的建立 | 第74-75页 |
| 3.4.2.2 纳滤膜过滤浓缩发酵液 | 第75-76页 |
| 3.4.2.3 Bacilysin吸附树脂的工艺优化 | 第76-78页 |
| 3.5 本章小结 | 第78-79页 |
| 第四章 Bacilysin抑菌活性及药物动力学的研究 | 第79-86页 |
| 4.1 前言 | 第79页 |
| 4.2 材料和方法 | 第79-83页 |
| 4.2.1 Bacilysin最低抑菌浓度(MICs)测定 | 第79-80页 |
| 4.2.2 Bacilysin急性毒性实验 | 第80-81页 |
| 4.2.3 Bacilysin体外肝代谢实验 | 第81-83页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第83-85页 |
| 4.3.1 Bacilysin的体外抑菌试验 | 第83页 |
| 4.3.2 Bacilysin急性毒性试验 | 第83-84页 |
| 4.3.3 Bacilysin的体外肝代谢实验 | 第84-85页 |
| 4.4 本章小结 | 第85-86页 |
| 第五章 抗真菌化合物Bacilysin的抑曹机理研究 | 第86-111页 |
| 5.1 前言 | 第86页 |
| 5.2 试验方法 | 第86-96页 |
| 5.2.1 白色假丝酵母基因组提取 | 第87页 |
| 5.2.2 GlcN-6-P synthase基因的体外PCR、酶切与酶连 | 第87-92页 |
| 5.2.3 Bacilysin对葡萄糖胺-6-磷酸合成酶(GlcN-6-P synthase)的抑制作用 | 第92页 |
| 5.2.3.1 GlcN-6-P s-thase酶活测定方法 | 第92页 |
| 5.2.3.2 硝基苯胺(p-nitroaniline)标准曲线的绘制 | 第92页 |
| 5.2.3.3 酶的最适温度 | 第92页 |
| 5.2.4 Bacilysin对GlcN-6-P synthase的抑制作用研究 | 第92-93页 |
| 5.2.5 葡萄糖胺-6-磷酸合成酶(GlcN-6-P synthase)的模型构建 | 第93页 |
| 5.2.6 Bacilysin对葡萄糖胺-6-磷酸合成酶(GlcN-6-P synthase)的抑制机理模拟 | 第93-95页 |
| 5.2.6.1 配体(bacilysin)与大分子(GlcN-6-P synthase)的分子对接 | 第93-94页 |
| 5.2.6.2 配体(bacilysin)与大分子(GlcN-6-P synthase)复合物的分子动力学模拟 | 第94-95页 |
| 5.2.7 分子模拟抗菌肽的输送机理 | 第95-96页 |
| 5.2.7.1 PTR22转运蛋白的同源建模 | 第95-96页 |
| 5.2.7.2 药物分子与转运蛋白的分子对接 | 第96页 |
| 5.2.7.3 转运蛋白的分子动力学(MD)模拟 | 第96页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第96-109页 |
| 5.3.1 葡萄糖胺-6-磷酸合成酶(GlcN-6-P synthase)的异源表达 | 第96-100页 |
| 5.3.2 Bacilysin对Gfa的抑制作用 | 第100-102页 |
| 5.3.3 PTR22转运蛋白的同源建模与模型评价 | 第102-104页 |
| 5.3.4 分子模拟抗菌肽的输送机里 | 第104-107页 |
| 5.3.5 分子模拟bacilysin与Gfa的作用机理 | 第107-109页 |
| 5.4 本章小结 | 第109-111页 |
| 第六章 Bacilycin前体氨基酸anticapsin的生物合成 | 第111-123页 |
| 6.1 前言 | 第111页 |
| 6.2 实验材料与方法 | 第111-115页 |
| 6.2.1 敲除质粒(pBAC-CE)的构建 | 第111-113页 |
| 6.2.2 解淀粉芽孢杆菌感受态的制备 | 第113页 |
| 6.2.3 敲除质粒电转化及其优化 | 第113-114页 |
| 6.2.4 抗真菌药物前体(anticapsin)的摇瓶发酵 | 第114页 |
| 6.2.5 Anticapsin的提取与分析方法 | 第114-115页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第115-122页 |
| 6.3.1 敲除质粒(pBAC-CE)的构建 | 第115-117页 |
| 6.3.2 pBAC-CE质粒转化与bacD基因敲除及其验证 | 第117-120页 |
| 6.3.3 工程菌产anticapsin的研究 | 第120-122页 |
| 6.4 本章小结 | 第122-123页 |
| 第七章 结论与展望 | 第123-127页 |
| 7.1 结论 | 第123-125页 |
| 7.2 展望 | 第125-127页 |
| 附录 | 第127-134页 |
| 作者简介及博士期间的研究成果 | 第134-135页 |
| 参考文献 | 第135-147页 |
