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水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)进化分析及基因表达调控研究

缩略词表第4-8页
中文摘要第8-10页
Abstract第10-11页
1.引言第12-20页
    1.1 水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)第12-15页
        1.1.1 水稻黑条矮缩病毒粒子特征第12页
        1.1.2 水稻黑条矮缩病的症状及危害第12-13页
        1.1.3 水稻黑条矮缩病毒的传播方式及传播介体第13页
        1.1.4 水稻黑条矮缩病毒的基因组结构特点及编码蛋白第13-15页
    1.2 植物RNA病毒的群体遗传第15-17页
        1.2.1 随机突变第16页
        1.2.2 RNA重组第16页
        1.2.3 RNA重排第16页
        1.2.4 病毒种群遗传结构的系统进化分析第16-17页
    1.3 植物RNA病毒的基因表达策略第17-19页
        1.3.1 植物RNA病毒基因组的复制调控第17-18页
        1.3.2 植物RNA病毒基因组的翻译调控第18-19页
    1.4 研究目的及意义第19-20页
2.材料和方法第20-32页
    2.1 材料第20-21页
        2.1.1 菌株、质粒、植物种子第20页
        2.1.2 RBSDV感病玉米第20页
        2.1.3 生物化学试剂第20页
        2.1.4 实验仪器第20页
        2.1.5 引物第20-21页
    2.2 方法第21-32页
        2.2.1 植物总RNA提取第21页
        2.2.2 反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)第21-22页
        2.2.3 重叠PCR第22页
        2.2.4 目的DNA条带的回收第22页
        2.2.5 DNA浓缩第22-23页
        2.2.6 连接反应第23页
        2.2.7 大肠杆菌DH5α和BL21(DE3)Rosetta细胞制备第23-24页
        2.2.8 大肠杆菌DH5α和BL21(DE3)Rosetta细胞的转化第24页
        2.2.9 菌落快速鉴定(Cracking)第24页
        2.2.10 碱裂解法提取质粒第24-25页
        2.2.11 菌落PCR第25页
        2.2.12 体外转录第25-26页
        2.2.13 体外翻译第26页
        2.2.14 原核表达第26-27页
        2.2.15 可溶性检测第27-28页
        2.2.16 包涵体蛋白的提取第28-29页
        2.2.17 Western Blot第29-30页
        2.2.18 拟南芥愈伤组织的培养第30-31页
        2.2.19 进化分析(序列一致率分析,系统进化树分析,RNA重组分析)第31-32页
3.结果与分析第32-47页
    3.1 RBSDV江苏玉米分离物全基因组克隆及进化分析第32-38页
        3.1.1 RBSDV基因组的RT-PCR及测序第32-33页
        3.1.2 RBSDV江苏玉米分离物的基因组结构第33-34页
        3.1.3 RBSDV基因组序列一致性分析第34-35页
        3.1.4 系统进化树分析第35-37页
        3.1.5 RNA重组分析第37-38页
    3.2 RBSDV翻译调控的研究第38-44页
        3.2.1 Fluc融合载体的构建第38-39页
        3.2.2 S3和S10的 5’UTR和 3’UTR对翻译的调控作用第39-40页
        3.2.3 S3和S10的 5’UTR对翻译关键调控序列定位第40-42页
        3.2.4 S3和S10的 3’UTR抑制 5’UTR正调控第42-44页
    3.3 RBSDV RdRp原核表达及纯化第44-47页
        3.3.1 RBSDV RdRp原核表达载体的构建第44页
        3.3.2 RBSDV RdRp的原核表达及可溶性检测第44-45页
        3.3.3 RBSDV RdRp的原核表达产物的包涵体蛋白提取及复性第45-47页
4.讨论第47-49页
    4.1 水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)的进化第47页
    4.2 RBSDV基因组翻译机制的研究第47-48页
    4.3 RBSDV RdRp原核表达第48-49页
5.结论第49-50页
参考文献第50-57页
致谢第57-58页
硕士期间发表的论文第58-59页
附表1引物列表第59-64页
附表2质粒列表第64-68页
附表3利用RDP4对RBSDV分离物的重组分析第68-69页

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