| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-25页 |
| 1.1 miRNA的生物合成与作用机制 | 第12-13页 |
| 1.2 miRNA在哺乳动物性腺发育中的作用 | 第13-17页 |
| 1.2.1 miRNA参与性别调控网络 | 第13-15页 |
| 1.2.2 miRNA在卵巢发育中的作用 | 第15-16页 |
| 1.2.3 miRNA在精巢发育中的作用 | 第16-17页 |
| 1.3 Forkhead基因家族在性腺发育性别调控中的作用 | 第17-19页 |
| 1.4 miRNA在鱼类性腺发育性别调控中的作用 | 第19-21页 |
| 1.5 研究动物的选择 | 第21-23页 |
| 1.6 本研究的目的与意义 | 第23页 |
| 1.7 技术路线图 | 第23-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-41页 |
| 2.1 实验对象 | 第25页 |
| 2.2 黄鳝性别分化时期的组织学鉴定 | 第25-26页 |
| 2.3 青鳉幼鱼性激素暴露实验 | 第26-27页 |
| 2.3.1 性激素 | 第26页 |
| 2.3.2 暴露实验 | 第26-27页 |
| 2.4 组织总RNA提取 | 第27-28页 |
| 2.5 黄鳝小RNA高通量测序与数据分析 | 第28-29页 |
| 2.6 黄鳝不同发育阶段miRNA的差异表达 | 第29页 |
| 2.7 黄鳝miRNA靶基因的预测与注释 | 第29-30页 |
| 2.8 黄鳝差异表达miRNA的stem-loop RT-qPCR检测 | 第30-31页 |
| 2.9 黄鳝miRNA靶基因表达量检测 | 第31页 |
| 2.10 黄鳝mRNA各组织表达差异 | 第31-32页 |
| 2.11 青鳉雌雄成鱼及幼鱼miRNA的表达量检测 | 第32-33页 |
| 2.12 青鳉miRNA靶基因表达量检测 | 第33-34页 |
| 2.13 目的基因全长cDNA的克隆与测序 | 第34-36页 |
| 2.14 双荧光素酶验证靶基因 | 第36-40页 |
| 2.14.1 突变片段构建 | 第36-37页 |
| 2.14.2 双荧光素酶载体构建 | 第37-38页 |
| 2.14.3 无内毒素质粒提取 | 第38页 |
| 2.14.4 细胞转染与检测 | 第38-39页 |
| 2.14.5 双荧光素酶检验 | 第39-40页 |
| 2.15 序列与数据分析 | 第40-41页 |
| 第三章 结果与分析 | 第41-67页 |
| 3.1 黄鳝小RNA高通量测序结果分析 | 第41-42页 |
| 3.2 黄鳝保守的miRNA与miRNA~*鉴定 | 第42-44页 |
| 3.3 黄鳝10个高表达量的miRNA | 第44-45页 |
| 3.4 黄鳝不同发育阶段miRNA的表达差异分析 | 第45-47页 |
| 3.5 黄鳝miRNA表达量的stem-loop RT-qPCR检验 | 第47页 |
| 3.6 黄鳝性别相关基因mRNA水平的表达差异 | 第47-50页 |
| 3.7 黄鳝miR-430家族靶基因的预测 | 第50-54页 |
| 3.8 青鳉雌雄成鱼中miR-430家族的表达差异 | 第54-55页 |
| 3.9 性激素暴露后青鳉幼鱼miR-430b与foxl2、vasa基因的表达 | 第55-56页 |
| 3.10 双荧光素酶分别验证黄鳝、青鳉foxl2与miR-430的关系 | 第56-58页 |
| 3.11 黄鳝foxl3 cDNA序列的分析 | 第58-59页 |
| 3.12 黄鳝Foxl3氨基酸序列比对分析 | 第59-60页 |
| 3.13 Forkhead基因家族进化发育树的构建 | 第60-62页 |
| 3.14 黄鳝foxl3在各组织中mRNA水平的表达差异 | 第62-63页 |
| 3.15 预测可能调控黄鳝foxl3和foxl2的miRNA | 第63-65页 |
| 3.16 双荧光素酶分别验证黄鳝foxl3与miR-9、miR-430a的关系 | 第65-67页 |
| 第四章 讨论 | 第67-75页 |
| 4.1 黄鳝Let-7、miR-143和miR-181 | 第67-68页 |
| 4.2 黄鳝与青鳉miR-430 | 第68-72页 |
| 4.2.1 黄鳝miR-430靶基因调控网络 | 第68-70页 |
| 4.2.2 青鳉foxl2基因在性激素暴露后的表达 | 第70-71页 |
| 4.2.3 青鳝与黄鳝miR-430对foxl2调控的差异 | 第71-72页 |
| 4.3 黄鳝foxl3与miRNA在性逆转过程中可能存在的调控机制 | 第72-75页 |
| 总结 | 第75-77页 |
| 主要结论 | 第75页 |
| 主要创新点 | 第75-76页 |
| 需要进一步研究的问题 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-94页 |
| 附录 | 第94-111页 |
| 本研究所用到的引物 | 第94-99页 |
| 本研究的补充材料 | 第99-109页 |
| 个人简历 | 第109页 |
| 博士期间发表的论文 | 第109-110页 |
| 参加的学术会议 | 第110页 |
| 博士期间已完成未发表的研究成果 | 第110-111页 |
| 致谢 | 第111页 |
