| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一章 绪论 | 第17-37页 |
| 1.1 致死突变 | 第17-18页 |
| 1.1.1 致死发生的原因 | 第17页 |
| 1.1.2 致死基因的分类 | 第17-18页 |
| 1.2 果蝇致死基因相关研究 | 第18-19页 |
| 1.2.1 果蝇温敏致死突变基因Pros（Pros261和Prosβ21） | 第18页 |
| 1.2.2 Triplo-lethal基因座 | 第18-19页 |
| 1.2.3 果蝇拓扑异构酶 | 第19页 |
| 1.3 家蚕致死基因的相关研究 | 第19-28页 |
| 1.3.1 家蚕致死基因的相关研究 | 第24-26页 |
| 1.3.2 家蚕致死基因的实际应用 | 第26-28页 |
| 1.4 拓扑异构酶研究背景 | 第28-30页 |
| 1.4.1 拓扑异构酶的分类 | 第29页 |
| 1.4.2 拓扑异构酶的生物学功能 | 第29-30页 |
| 1.5 基因功能的研究方法概述 | 第30-35页 |
| 1.5.1 RNAi技术 | 第30-31页 |
| 1.5.2 基因组编辑技术 | 第31-34页 |
| 1.5.3 GAL4/UAS系统 | 第34-35页 |
| 1.6 研究目的和意义 | 第35页 |
| 1.7 主要研究内容和方法 | 第35-37页 |
| 第二章 家蚕4龄幼虫致死突变体l-4i的表型特征与遗传分析 | 第37-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第37页 |
| 2.2 遗传分析方法 | 第37-38页 |
| 2.3 结果与分析 | 第38-40页 |
| 2.3.1 l-4i突变体的形状特征 | 第38页 |
| 2.3.2 l-4i突变体的遗传分析 | 第38-40页 |
| 2.4 讨论 | 第40-43页 |
| 第三章 家蚕4龄幼虫致死突变体l-4i突变基因的连锁及定位分析 | 第43-55页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第43-45页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第43-44页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第44页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第44页 |
| 3.1.4 常用试剂配制 | 第44-45页 |
| 3.2 主要的实验方法 | 第45-46页 |
| 3.2.1 家蚕基因组DNA的提取方法 | 第45页 |
| 3.2.2 PCR反应体系的构建 | 第45-46页 |
| 3.2.3 琼脂糖凝胶电泳 | 第46页 |
| 3.2.4 多态性标记的筛选、连锁分析 | 第46页 |
| 3.2.5 新SSR标记的筛选及l-4i基因的精细定位和绘制基因连锁图 | 第46页 |
| 3.3 实验结果 | 第46-53页 |
| 3.3.1 试验材料饲养情况 | 第46-47页 |
| 3.3.2 BC1F及BC1M个体的表型与基因型 | 第47-49页 |
| 3.3.3 家蚕l-4i突变基因所在连锁群的确定 | 第49页 |
| 3.3.4 与家蚕l-4i基因连锁的新的SSR标记 | 第49-50页 |
| 3.3.5 BC1M回交群体的基因型分析及l-4i基因遗传连锁图的构建 | 第50-53页 |
| 3.4 讨论 | 第53-55页 |
| 第四章 家蚕4龄幼虫致死突变体l-4i候选基因的筛选 | 第55-71页 |
| 4.1 实验材料与试剂 | 第55-56页 |
| 4.1.1 实验材料的准备 | 第55页 |
| 4.1.2 主要实验仪器 | 第55页 |
| 4.1.3 主要实验试剂 | 第55-56页 |
| 4.2 主要的实验方法 | 第56-62页 |
| 4.2.1 家蚕总RNA的提取 | 第56页 |
| 4.2.2 总RNA经DNase I处理 | 第56-57页 |
| 4.2.3 第一链cDNA合成 | 第57页 |
| 4.2.4 real-time PCR（RT-PCR） | 第57-58页 |
| 4.2.5 DNA片段的回收 | 第58页 |
| 4.2.6 目的片段与pMD18-T载体连接 | 第58-59页 |
| 4.2.7 大肠杆菌感受态的制备： | 第59页 |
| 4.2.8 质粒DNA转化及阳性克隆筛选 | 第59-60页 |
| 4.2.9 RNA interference (RNAi) | 第60-62页 |
| 4.3 实验结果 | 第62-70页 |
| 4.3.1 半定量方法筛选候选基因 | 第62-64页 |
| 4.3.2 克隆测序方法筛选候选基因 | 第64-66页 |
| 4.3.3 RNA interference (RNAi)初步验证突变基因 | 第66-68页 |
| 4.3.4 家蚕拓扑异构酶基因（Bmtop）组织表达谱和龄期表达谱 | 第68-70页 |
| 4.4 讨论 | 第70-71页 |
| 第五章 候选基因的功能验证 | 第71-81页 |
| 5.1 实验材料与试剂 | 第71-72页 |
| 5.1.1 实验材料的准备 | 第71页 |
| 5.1.2 主要实验仪器 | 第71页 |
| 5.1.3 主要实验试剂 | 第71-72页 |
| 5.2 主要实验方法 | 第72-73页 |
| 5.2.1 拓扑异构酶抑制剂喜树碱（Camptothecin，CPT）添食实验 | 第72页 |
| 5.2.2 一步法提取家蚕活性总蛋白 | 第72页 |
| 5.2.3 DNA超螺旋解旋法测定拓扑异构酶酶活力 | 第72-73页 |
| 5.3 实验结果 | 第73-78页 |
| 5.3.1 CPT添食实验 | 第73-76页 |
| 5.3.2 拓扑异构酶酶活测定 | 第76-78页 |
| 5.4 讨论 | 第78-81页 |
| 结论 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-93页 |
| 博士期间学术论文发表情况 | 第93-95页 |
| 致谢 | 第95页 |
