| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 缩写词 | 第8-13页 |
| 1 前言 | 第13-23页 |
| 1.1 植物体内ROS的产生 | 第13-14页 |
| 1.2 ROS的功能 | 第14-15页 |
| 1.2.1 ROS调控植物器官的生长发育 | 第14-15页 |
| 1.2.2 ROS在植物防卫反应中的作用 | 第15页 |
| 1.3 ROS清除机制 | 第15-16页 |
| 1.3.1 酶促清除系统 | 第16页 |
| 1.4 拟南芥 | 第16-17页 |
| 1.4.1 拟南芥的生物学特性 | 第16-17页 |
| 1.4.2 拟南芥的遗传学特性 | 第17页 |
| 1.5 FMN结合蛋白的结构与功能 | 第17-19页 |
| 1.6 EMS诱变筛选突变体原理 | 第19-21页 |
| 1.7 立题依据 | 第21-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-41页 |
| 2.1 实验设备 | 第23-24页 |
| 2.2 常用实验软件及生物网站 | 第24页 |
| 2.2.1 常用实验软件 | 第24页 |
| 2.2.2 常用生物网站 | 第24页 |
| 2.3 实验材料、菌株和载体 | 第24-25页 |
| 2.3.1 实验材料 | 第24页 |
| 2.3.2 载体及菌株 | 第24-25页 |
| 2.4 实验试剂及重要耗材 | 第25-26页 |
| 2.5 实验溶液及培养基配制 | 第26-31页 |
| 2.5.1 常规溶液配制 | 第26-27页 |
| 2.5.2 抗生素的配制 | 第27页 |
| 2.5.3 常用培养基的配制 | 第27-28页 |
| 2.5.4 SDS-PAGE所用溶液配制 | 第28-29页 |
| 2.5.5 蛋白原核表达纯化溶液配制 | 第29页 |
| 2.5.6 SDS-PAGE蛋白胶的配制 | 第29-30页 |
| 2.5.7 EMS诱变试剂配制 | 第30-31页 |
| 2.6 实验方法 | 第31-41页 |
| 2.6.1 DH5α 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第31页 |
| 2.6.2 载体构建 | 第31-34页 |
| 2.6.3 原核蛋白的表达和提取 | 第34页 |
| 2.6.4 农杆菌感受态的制备与转化 | 第34-35页 |
| 2.6.5 拟南芥种植方法 | 第35页 |
| 2.6.6 农杆菌转染拟南芥植株 | 第35-36页 |
| 2.6.7 转基因植株的筛选 | 第36页 |
| 2.6.8 拟南芥DNA的提取 | 第36-37页 |
| 2.6.9 利用Trizol法提取拟南芥总RNA | 第37页 |
| 2.6.10 反转录制备拟南芥cDNA | 第37-38页 |
| 2.6.11 拟南芥纯合体的鉴定 | 第38页 |
| 2.6.12 EMS诱变 | 第38页 |
| 2.6.13 突变体筛选条件的确定 | 第38-39页 |
| 2.6.14 体式荧光显微镜筛选突变体 | 第39-41页 |
| 3 结果分析 | 第41-59页 |
| 3.1 FMN结合蛋白表达载体的构建 | 第41-42页 |
| 3.2 FMN结合蛋白在大肠杆菌中的表达和提纯 | 第42页 |
| 3.3 FMN结合蛋白的紫外可视吸收测定 | 第42-43页 |
| 3.4 FMN结合蛋白的荧光光谱测定 | 第43-44页 |
| 3.5 FMN结合蛋白在大肠杆菌体内成像 | 第44-45页 |
| 3.6 FMN结合蛋白体内荧光随时间变化情况 | 第45-46页 |
| 3.7 不同浓度H2O2和DTT处理后FMN结合蛋白体内成像 | 第46-48页 |
| 3.8 FMN结合蛋白转拟南芥超表达载体的构建 | 第48-49页 |
| 3.9 FMN结合蛋白转植物纯合体鉴定 | 第49-50页 |
| 3.10 EMS诱变 | 第50-51页 |
| 3.11 FMN结合蛋白氧化还原敏感突变体初筛指标的确定 | 第51-56页 |
| 3.11.1 不同浓度H2O2处理 | 第51-52页 |
| 3.11.2 不同浓度SA处理 | 第52-53页 |
| 3.11.3 不同浓度NaCl处理 | 第53-54页 |
| 3.11.4 不同浓度甘露醇处理 | 第54-55页 |
| 3.11.5 不同浓度MV处理 | 第55-56页 |
| 3.12 FMN结合蛋白ROS相关突变体筛选 | 第56-59页 |
| 4 讨论 | 第59-61页 |
| 4.1 对FMN结合蛋白光谱测定结果的分析 | 第59-60页 |
| 4.2 对FMN结合蛋白大肠杆菌体内成像结果的分析 | 第60页 |
| 4.3 对FMN结合蛋白氧化还原突变体初步筛选条件确定的结果分析 | 第60页 |
| 4.4 对FMN结合蛋白氧化还原突变体筛选结果的预测 | 第60-61页 |
| 5 结论 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 致谢 | 第69-71页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第71页 |
