| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 英文缩略表 | 第13-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-34页 |
| ·布鲁氏菌病概况 | 第15-19页 |
| ·病原学特征 | 第15页 |
| ·流行状况与危害 | 第15-17页 |
| ·诊断方法 | 第17页 |
| ·布鲁氏菌致病性 | 第17-18页 |
| ·布鲁氏菌宿主免疫防御 | 第18-19页 |
| ·布病疫苗研究进展 | 第19-25页 |
| ·减毒活疫苗 | 第20-21页 |
| ·灭活疫苗 | 第21-22页 |
| ·突变株疫苗 | 第22-23页 |
| ·重组蛋白疫苗 | 第23-24页 |
| ·基因缺失疫苗 | 第24-25页 |
| ·活载体疫苗 | 第25页 |
| ·展望 | 第25页 |
| ·DNA 疫苗研究进展 | 第25-29页 |
| ·DNA 疫苗概述 | 第25-27页 |
| ·作用机制 | 第27页 |
| ·DNA 疫苗的优化策略 | 第27-28页 |
| ·布鲁氏菌 DNA 疫苗 | 第28-29页 |
| ·腺病毒载体研究进展 | 第29-31页 |
| ·腺病毒概述 | 第29页 |
| ·腺病毒载体的构建 | 第29-30页 |
| ·腺病毒载体的优缺点 | 第30页 |
| ·腺病毒载体在疫苗研究中的应用 | 第30-31页 |
| ·本研究的目的意义及内容 | 第31-34页 |
| ·研究的目的意义 | 第31-33页 |
| ·研究内容和方法 | 第33-34页 |
| 第二章 布鲁氏菌目的基因的克隆及 LAMP 快速检测方法的建立 | 第34-44页 |
| ·材料与方法 | 第34-39页 |
| ·OMP25、L7/L12、BCSP31、P39 和 18KD 基因的克隆 | 第34-36页 |
| ·引物 | 第34页 |
| ·布鲁氏菌全基因组 DNA 提取 | 第34-35页 |
| ·目的基因的克隆与转化 | 第35-36页 |
| ·布鲁氏菌 LAMP 快速检测方法的建立 | 第36-39页 |
| ·试验菌株 | 第36页 |
| ·主要的酶和试剂 | 第36-38页 |
| ·LAMP 引物 | 第38页 |
| ·DNA 模板的制备 | 第38页 |
| ·LAMP 扩增体系的优化及检测方法的建立 | 第38-39页 |
| ·LAMP 方法特异性鉴定 | 第39页 |
| ·LAMP 方法敏感性鉴定 | 第39页 |
| ·田间样品的检测 | 第39页 |
| ·结果 | 第39-42页 |
| ·目的基因扩增与克隆载体鉴定 | 第39-40页 |
| ·LAMP 检测方法的建立 | 第40-41页 |
| ·LAMP 检测方法的特异性 | 第41页 |
| ·LAMP 检测方法的敏感性 | 第41-42页 |
| ·田间样品的检测 | 第42页 |
| ·讨论 | 第42-44页 |
| 第三章 布鲁氏菌共表达 DNA 疫苗的构建与鉴定 | 第44-57页 |
| ·材料与方法 | 第44-52页 |
| ·细胞、菌株及质粒 | 第44页 |
| ·主要试剂和工具酶 | 第44-45页 |
| ·主要仪器设备 | 第45页 |
| ·主要试剂和溶液配置 | 第45-46页 |
| ·P39 和 18KD 基因的克隆 | 第46-47页 |
| ·P39 与 18KD 基因 PQC-P39/18KD 载体的构建与鉴定 | 第47页 |
| ·PCDNA-P39/18KD 重组质粒的构建与鉴定 | 第47-49页 |
| ·阳性重组质粒的筛选和鉴定 | 第49页 |
| ·去内毒素质粒 DNA 的制备与定量 | 第49-50页 |
| ·人胚肾细胞 293AD 培养与保存 | 第50页 |
| ·重组真核表达质粒转染 293AD 细胞 | 第50页 |
| ·间接免疫荧光检测 | 第50-51页 |
| ·RT-PCR 鉴定 | 第51-52页 |
| ·Western blot 检测重组蛋白在 293AD 细胞中的表达 | 第52页 |
| ·结果 | 第52-55页 |
| ·P39 和 18KD 基因的克隆 | 第52页 |
| ·重组真核质粒的构建与鉴定 | 第52-53页 |
| ·免疫荧光检测外源基因的瞬时表达 | 第53页 |
| ·RT-PCR 鉴定 | 第53-54页 |
| ·Western blot 检测重组质粒在 293AD 细胞中的表达 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| 第四章 布鲁氏菌共表达重组腺病毒疫苗的构建与鉴定 | 第57-72页 |
| ·材料与方法 | 第57-65页 |
| ·细胞、菌株及质粒 | 第57页 |
| ·主要试剂和工具酶 | 第57-58页 |
| ·主要仪器设备 | 第58页 |
| ·主要试剂配置 | 第58页 |
| ·L7/L12 与 BCSP31 基因的克隆 | 第58-59页 |
| ·PQC-LL/BP 载体的构建与鉴定 | 第59页 |
| ·重组腺病毒穿梭载体 pSh-LL/BP 的构建与鉴定 | 第59-60页 |
| ·同源重组用线性化重组腺病毒穿梭载体的获得 | 第60-61页 |
| ·携带腺病毒骨架载体工程菌 BJ5183-AD-1 的制备 | 第61页 |
| ·BJ5183 感受态细胞的制备 | 第61页 |
| ·腺病毒骨架载体 pAdEasy-1 质粒的转化 | 第61页 |
| ·电转 BJ5183-AD-1 感受态细胞的制备 | 第61-62页 |
| ·电转化 BJ5183-AD-1 细菌感受态细胞 | 第62页 |
| ·复制缺陷型重组腺病毒质粒的鉴定 | 第62页 |
| ·阳性重组子在宿主菌 DH10B 中的大量扩增回收 | 第62页 |
| ·293AD 细胞的复苏与传代 | 第62-63页 |
| ·复制缺陷型重组腺病毒的包装 | 第63页 |
| ·重组腺病毒的扩毒 | 第63-64页 |
| ·重组腺病毒的鉴定 | 第64页 |
| ·PCR 鉴定 | 第64页 |
| ·电镜观察 | 第64页 |
| ·IFA 检测重组腺病毒的表达 | 第64页 |
| ·Western Blot 鉴定 | 第64页 |
| ·重组腺病毒稳定性检测 | 第64页 |
| ·重组腺病毒的 CsCl 密度梯度纯化 | 第64-65页 |
| ·重组病毒 TCID50 测定 | 第65页 |
| ·结果 | 第65-70页 |
| ·pSh-LL/BP 穿梭载体的构建与鉴定 | 第65-66页 |
| ·重组腺病毒 pAd-LL/BP 载体的构建 | 第66页 |
| ·重组腺病毒 Ad-LL/BP 的包装 | 第66-67页 |
| ·Ad-LL/BP 重组腺病毒 PCR 鉴定 | 第67-68页 |
| ·重组腺病毒电镜观察 | 第68页 |
| ·免疫荧光检测 Ad-LL/BP 上外源基因的表达 | 第68-69页 |
| ·Western blot 检测 Ad-LL/BP 外源基因的表达 | 第69-70页 |
| ·重组腺病毒遗传稳定性检测 | 第70页 |
| ·重组腺病毒 TCID50 测定 | 第70页 |
| ·讨论 | 第70-72页 |
| 第五章 共表达重组腺病毒与 DNA 疫苗联合免疫效果的研究 | 第72-86页 |
| ·材料与方法 | 第72-77页 |
| ·实验动物 | 第72页 |
| ·疫苗及佐剂 | 第72-73页 |
| ·主要试剂 | 第73页 |
| ·主要仪器耗材 | 第73页 |
| ·溶液配制 | 第73-74页 |
| ·免疫方案 | 第74-76页 |
| ·小鼠血清采集 | 第76页 |
| ·血清中特异性抗体检测 | 第76页 |
| ·小鼠脾淋巴细胞的制备 | 第76页 |
| ·MTT 淋巴细胞转化试验 | 第76-77页 |
| ·脾脏 T 淋巴细胞亚群分析 | 第77页 |
| ·脾淋巴细胞分泌细胞因子检测 | 第77页 |
| ·统计学分析 | 第77页 |
| ·结果 | 第77-83页 |
| ·小鼠血清特异性抗体检测 | 第77-78页 |
| ·MTT 淋巴细胞转化试验 | 第78-80页 |
| ·脾脏 T 淋巴细胞亚群分析 | 第80-82页 |
| ·脾淋巴细胞分泌细胞因子检测 | 第82-83页 |
| ·讨论 | 第83-86页 |
| 第六章 全文结论 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-101页 |
| 致谢 | 第101-102页 |
| 作者简历 | 第102页 |
