摘要 | 第1-8页 |
Abstract | 第8-10页 |
目录 | 第10-14页 |
英文缩略表 | 第14-15页 |
第一章 绪论 | 第15-31页 |
·猪繁殖与呼吸综合征病毒的分子生物学研究进展 | 第15-22页 |
·病原的分类地位及物化特征 | 第15-16页 |
·PRRSV 基因组成及其特性 | 第16-17页 |
·PRRSV 基因组的复制和转录 | 第17-19页 |
·PRRSV 编码的蛋白及其功能 | 第19-21页 |
·PRRS 疫苗研究进展 | 第21-22页 |
·单股正链 RNA 病毒 RdRp 的结构与功能研究进展 | 第22-26页 |
·RdRp 区域和结构的预测 | 第23-25页 |
·SDD 结构域 | 第25-26页 |
·RNA 病毒重组机制及其研究进展 | 第26-31页 |
·RNA 病毒重组机制 | 第26-28页 |
·研究进展 | 第28-31页 |
第二章 动脉炎病毒 RdRp功能区的分析 | 第31-34页 |
·材料与方法 | 第31页 |
·材料 | 第31页 |
·方法 | 第31页 |
·结果 | 第31-33页 |
·RNA 病毒 RdRp 功能域氨基酸序列比对结果 | 第31-32页 |
·病毒模体 C 保守氨基酸差异分析 | 第32-33页 |
·讨论 | 第33-34页 |
第三章 PRRSV RdRp中 SDD 功能区的突变分析 | 第34-60页 |
·材料与方法 | 第34-52页 |
·细胞与质粒 | 第34页 |
·试剂 | 第34-35页 |
·主要仪器 | 第35页 |
·PRRSV RdRp SDD 区域突变克隆的构建 | 第35-42页 |
·突变质粒 DNA 转染 BHK-21 细胞 | 第42-43页 |
·细胞传代培养 | 第43页 |
·病毒上清 RNA 的提取 | 第43-44页 |
·细胞总 RNAs 的提取 | 第44页 |
·RT-PCR 检测病毒正负链基因组及亚基因组 | 第44-48页 |
·间接免疫荧光试验(IFA) | 第48页 |
·Northern blot 分析 | 第48页 |
·病毒多步生长曲线的绘制 | 第48-49页 |
·全基因组测序 | 第49-52页 |
·结果 | 第52-57页 |
·PRRSV SDD 系列突变克隆的构建结果 | 第52-53页 |
·RdRp 突变体转染细胞及对 sg mRNA 转录复制的影响 | 第53-54页 |
·PRRSV RdRp 中 SDD 模体的突变导致转录功能的破坏 | 第54-55页 |
·突变病毒的病毒滴定分析以及亚基因组 mRNAs 转录 | 第55-56页 |
·vGDD(3050G)的稳定性分析 | 第56-57页 |
·讨论 | 第57-60页 |
第四章 PRRSV 基因组重组的研究 | 第60-69页 |
·材料与方法 | 第60-63页 |
·细胞与质粒 | 第60-61页 |
·试剂 | 第61页 |
·主要仪器 | 第61页 |
·PRRSV 复制子质粒共转染体系的建立 | 第61页 |
·初步建立共转染体系 | 第61-63页 |
·细胞传代培养 | 第63页 |
·病毒上清 RNA 的提取及 RT-PCR 检测 | 第63页 |
·间接免疫荧光试验(IFA) | 第63页 |
·重组序列分析 | 第63页 |
·结果 | 第63-67页 |
·重组病毒拯救的构建 | 第63-64页 |
·重组病毒 N 蛋白的翻译表达 | 第64-65页 |
·重组区域序列分析 | 第65-67页 |
·讨论 | 第67-69页 |
第五章 动脉炎病毒 RdRp的嵌合研究 | 第69-85页 |
·材料与方法 | 第70-80页 |
·细胞与质粒 | 第70页 |
·试剂 | 第70页 |
·主要仪器 | 第70页 |
·PRRSV 基因型内之间和基因型间 ORF1b 嵌合克隆的构建 | 第70-79页 |
·突变质粒 DNA 转染 BHK-21 细胞 | 第79页 |
·转染后细胞 RNAs 的提取以及正链亚基因组 7(sg mRNA7)的鉴定 | 第79页 |
·负链亚基因组[g(-)RNA]的鉴定 | 第79-80页 |
·间接免疫荧光试验(IFA) | 第80页 |
·结果 | 第80-83页 |
·嵌合全长克隆质粒的构建 | 第80-82页 |
·嵌合体转染细胞及对 sg mRNA 转录复制的影响 | 第82页 |
·ORF1b 互换后导致亚基因组 mRNA 的合成和 N 蛋白的表达功能的缺失 | 第82页 |
·ORF1b 互换后 RdRp 复制功能正常 | 第82-83页 |
·讨论 | 第83-85页 |
第六章 结论 | 第85-86页 |
参考文献 | 第86-94页 |
致谢 | 第94-95页 |
作者简介 | 第95-97页 |