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猪繁殖与呼吸综合征病毒RdRp的功能解析

摘要第1-8页
Abstract第8-10页
目录第10-14页
英文缩略表第14-15页
第一章 绪论第15-31页
   ·猪繁殖与呼吸综合征病毒的分子生物学研究进展第15-22页
     ·病原的分类地位及物化特征第15-16页
     ·PRRSV 基因组成及其特性第16-17页
     ·PRRSV 基因组的复制和转录第17-19页
     ·PRRSV 编码的蛋白及其功能第19-21页
     ·PRRS 疫苗研究进展第21-22页
   ·单股正链 RNA 病毒 RdRp 的结构与功能研究进展第22-26页
     ·RdRp 区域和结构的预测第23-25页
     ·SDD 结构域第25-26页
   ·RNA 病毒重组机制及其研究进展第26-31页
     ·RNA 病毒重组机制第26-28页
     ·研究进展第28-31页
第二章 动脉炎病毒 RdRp功能区的分析第31-34页
     ·材料与方法第31页
     ·材料第31页
     ·方法第31页
   ·结果第31-33页
     ·RNA 病毒 RdRp 功能域氨基酸序列比对结果第31-32页
     ·病毒模体 C 保守氨基酸差异分析第32-33页
   ·讨论第33-34页
第三章 PRRSV RdRp中 SDD 功能区的突变分析第34-60页
   ·材料与方法第34-52页
     ·细胞与质粒第34页
     ·试剂第34-35页
     ·主要仪器第35页
     ·PRRSV RdRp SDD 区域突变克隆的构建第35-42页
     ·突变质粒 DNA 转染 BHK-21 细胞第42-43页
     ·细胞传代培养第43页
     ·病毒上清 RNA 的提取第43-44页
     ·细胞总 RNAs 的提取第44页
     ·RT-PCR 检测病毒正负链基因组及亚基因组第44-48页
     ·间接免疫荧光试验(IFA)第48页
     ·Northern blot 分析第48页
     ·病毒多步生长曲线的绘制第48-49页
     ·全基因组测序第49-52页
   ·结果第52-57页
     ·PRRSV SDD 系列突变克隆的构建结果第52-53页
     ·RdRp 突变体转染细胞及对 sg mRNA 转录复制的影响第53-54页
     ·PRRSV RdRp 中 SDD 模体的突变导致转录功能的破坏第54-55页
     ·突变病毒的病毒滴定分析以及亚基因组 mRNAs 转录第55-56页
     ·vGDD(3050G)的稳定性分析第56-57页
   ·讨论第57-60页
第四章 PRRSV 基因组重组的研究第60-69页
   ·材料与方法第60-63页
     ·细胞与质粒第60-61页
     ·试剂第61页
     ·主要仪器第61页
     ·PRRSV 复制子质粒共转染体系的建立第61页
     ·初步建立共转染体系第61-63页
     ·细胞传代培养第63页
     ·病毒上清 RNA 的提取及 RT-PCR 检测第63页
     ·间接免疫荧光试验(IFA)第63页
     ·重组序列分析第63页
   ·结果第63-67页
     ·重组病毒拯救的构建第63-64页
     ·重组病毒 N 蛋白的翻译表达第64-65页
     ·重组区域序列分析第65-67页
   ·讨论第67-69页
第五章 动脉炎病毒 RdRp的嵌合研究第69-85页
   ·材料与方法第70-80页
     ·细胞与质粒第70页
     ·试剂第70页
     ·主要仪器第70页
     ·PRRSV 基因型内之间和基因型间 ORF1b 嵌合克隆的构建第70-79页
     ·突变质粒 DNA 转染 BHK-21 细胞第79页
     ·转染后细胞 RNAs 的提取以及正链亚基因组 7(sg mRNA7)的鉴定第79页
     ·负链亚基因组[g(-)RNA]的鉴定第79-80页
     ·间接免疫荧光试验(IFA)第80页
   ·结果第80-83页
     ·嵌合全长克隆质粒的构建第80-82页
     ·嵌合体转染细胞及对 sg mRNA 转录复制的影响第82页
     ·ORF1b 互换后导致亚基因组 mRNA 的合成和 N 蛋白的表达功能的缺失第82页
     ·ORF1b 互换后 RdRp 复制功能正常第82-83页
   ·讨论第83-85页
第六章 结论第85-86页
参考文献第86-94页
致谢第94-95页
作者简介第95-97页

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