| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 符号说明及缩略词 | 第13-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-34页 |
| 1.1 生物表面活性剂 | 第14-16页 |
| 1.1.1 生物表面活性剂概述 | 第14页 |
| 1.1.2 表面活性剂的分类和微生物来源 | 第14-16页 |
| 1.2 槐糖脂的结构和性质 | 第16-18页 |
| 1.2.1 槐糖脂的结构 | 第16-17页 |
| 1.2.2 槐糖脂的性质 | 第17-18页 |
| 1.3 槐糖脂产生菌 | 第18-19页 |
| 1.4 槐糖脂的生物合成 | 第19-22页 |
| 1.4.1 槐糖脂的理论合成通路 | 第19-21页 |
| 1.4.2 槐糖脂合成所需特异性酶 | 第21-22页 |
| 1.4.2.1 脂肪酸羟基化 | 第21页 |
| 1.4.2.2 与葡萄糖分子的耦合 | 第21-22页 |
| 1.4.2.3 乙酰化和内酯化 | 第22页 |
| 1.5 影响槐糖脂发酵生产的因素 | 第22-26页 |
| 1.5.1 培养基组成 | 第22-25页 |
| 1.5.1.1 亲水性碳源对槐糖脂合成影响 | 第23-24页 |
| 1.5.1.2 疏水性碳源对槐糖脂合成影响 | 第24页 |
| 1.5.1.3 氮源对槐糖脂合成影响 | 第24-25页 |
| 1.5.2 发酵参数 | 第25-26页 |
| 1.5.2.1 温度 | 第25页 |
| 1.5.2.2 溶氧 | 第25-26页 |
| 1.5.2.3 pH值 | 第26页 |
| 1.5.2.4 发酵时间 | 第26页 |
| 1.6 降低槐糖脂发酵成本的策略 | 第26-29页 |
| 1.6.1 基因工程改造 | 第27页 |
| 1.6.2 以廉价底物发酵槐糖脂 | 第27-29页 |
| 1.6.3 补料发酵提高槐糖脂产量 | 第29页 |
| 1.7 槐糖脂的应用 | 第29-31页 |
| 1.7.1 石油工业中的应用 | 第30-31页 |
| 1.7.2 环境保护等其他领域的应用 | 第31页 |
| 1.8 选题依据、研究目的和研究内容 | 第31-34页 |
| 第二章 槐糖脂分泌相关基因的初步研究 | 第34-50页 |
| 引言 | 第34-35页 |
| 2.1 材料和方法 | 第35-42页 |
| 2.1.1 菌种 | 第35页 |
| 2.1.2 仪器和试剂 | 第35-36页 |
| 2.1.3 斜面及YEPD种子培养 | 第36页 |
| 2.1.4 W. domercqiae基因组小量提取 | 第36页 |
| 2.1.5 同源臂克隆 | 第36-37页 |
| 2.1.6 筛选标记的克隆 | 第37页 |
| 2.1.7 同源臂与筛选标记的融合 | 第37-38页 |
| 2.1.8 敲除盒的W.domercqiae电转化 | 第38-39页 |
| 2.1.9 敲除株筛选 | 第39页 |
| 2.1.10 野生株与敲除株槐糖脂组分比较 | 第39页 |
| 2.1.11 用分析型HPLC分析其槐糖脂含量 | 第39页 |
| 2.1.12 实时荧光定量PCR (RT-qPCR)分析野生株与敲除株中参与槐糖脂合成相关基因转录水平差异 | 第39-42页 |
| 2.1.12.1 检测的基因及所用引物 | 第39-40页 |
| 2.1.12.2 相关基因的实时荧光定量PCR分析 | 第40-42页 |
| 2.2 结果和讨论 | 第42-49页 |
| 2.2.1 敲除盒的构建 | 第42-44页 |
| 2.2.1.1 侧翼序列和筛选标记片段的扩增 | 第42-43页 |
| 2.2.1.2 同源臂和筛选标记融合 | 第43-44页 |
| 2.2.2 敲除株的筛选鉴定 | 第44-45页 |
| 2.2.3 敲除株的发酵分析 | 第45-46页 |
| 2.2.4 胞内外槐糖脂产物组分分析 | 第46-47页 |
| 2.2.5 敲除株槐糖脂合成相关基因表达量分析 | 第47-49页 |
| 2.3 本章小结 | 第49-50页 |
| 第三章 棉籽糖蜜和棉籽油生产槐糖脂 | 第50-64页 |
| 引言 | 第50-51页 |
| 3.1 材料和方法 | 第51-54页 |
| 3.1.1 菌种 | 第51页 |
| 3.1.2 仪器和试剂 | 第51-52页 |
| 3.1.3 斜面及YEPD种子培养 | 第52页 |
| 3.1.4 发酵培养 | 第52-53页 |
| 3.1.5 生物量的测定 | 第53页 |
| 3.1.6 葡萄糖浓度的测定 | 第53页 |
| 3.1.7 槐糖脂产量的测定 | 第53页 |
| 3.1.8 发酵液pH值的测定 | 第53页 |
| 3.1.9 发酵产物的提取 | 第53-54页 |
| 3.1.10 HPLC条件和时间程序 | 第54页 |
| 3.1.11 HPLC-MS组分分析 | 第54页 |
| 3.2 结果和讨论 | 第54-62页 |
| 3.2.1 亲水性碳源与疏水性碳源替换 | 第54-56页 |
| 3.2.2 氮源梯度实验 | 第56-57页 |
| 3.2.3 无机盐对新培养基的影响 | 第57-58页 |
| 3.2.4 单因素梯度实验 | 第58-59页 |
| 3.2.4.1 亲水性碳源梯度实验 | 第58页 |
| 3.2.4.2 疏水性碳源优化实验 | 第58-59页 |
| 3.2.5 二因子响应面实验 | 第59-61页 |
| 3.2.6 发酵产物的HPLC-MS鉴定分析 | 第61-62页 |
| 3.3 本章小结 | 第62-64页 |
| 第四章 拟威克酵母发酵参数优化及中试生产 | 第64-78页 |
| 引言 | 第64页 |
| 4.1 材料和方法 | 第64-69页 |
| 4.1.1 菌种 | 第64-65页 |
| 4.1.2 仪器和试剂 | 第65页 |
| 4.1.3 斜面及YEPD种子培养 | 第65页 |
| 4.1.4 发酵培养 | 第65-67页 |
| 4.1.4.1 摇瓶培养 | 第65页 |
| 4.1.4.2 四联发酵罐发酵 | 第65-66页 |
| 4.1.4.3 小型发酵罐模拟发酵 | 第66-67页 |
| 4.1.4.4 50 L中试发酵罐发酵 | 第67页 |
| 4.1.5 生物量的测定 | 第67页 |
| 4.1.6 葡萄糖浓度的测定 | 第67页 |
| 4.1.7 槐糖脂产量的测定 | 第67-68页 |
| 4.1.8 发酵液pH值的测定 | 第68页 |
| 4.1.9 发酵产物的提取 | 第68页 |
| 4.1.10 发酵液表面张力的测定 | 第68页 |
| 4.1.11 发酵液粘度测定 | 第68-69页 |
| 4.2 结果和讨论 | 第69-77页 |
| 4.2.1 不同温度对槐糖脂产量影响 | 第69页 |
| 4.2.2 转速条件优化 | 第69-71页 |
| 4.2.3 四联罐补料发酵 | 第71-73页 |
| 4.2.4 7.5 L发酵罐模拟发酵验证 | 第73-74页 |
| 4.2.5 50 L发酵罐中试生产 | 第74-77页 |
| 4.3 本章小结 | 第77-78页 |
| 第五章 拟威克酵母在石油工业的应用探索 | 第78-94页 |
| 引言 | 第78-79页 |
| 5.1 材料和方法 | 第79-82页 |
| 5.1.1 菌种 | 第79页 |
| 5.1.2 仪器和试剂 | 第79页 |
| 5.1.3 粗品槐糖脂发酵生产 | 第79页 |
| 5.1.4 驱油剂的制备 | 第79-80页 |
| 5.1.5 驱油剂表面张力的测定 | 第80页 |
| 5.1.6 驱油剂和原油的界面张力测定 | 第80页 |
| 5.1.7 驱油剂乳化能力测定 | 第80页 |
| 5.1.8 驱油剂与地层水粘度测定 | 第80页 |
| 5.1.9 驱油剂的驱油效果物理模拟 | 第80-82页 |
| 5.1.9.1 岩心模型 | 第80-81页 |
| 5.1.9.2 实验模型填装 | 第81页 |
| 5.1.9.3 抽真空饱和地层水 | 第81页 |
| 5.1.9.4 饱和原油 | 第81页 |
| 5.1.9.5 实验模型老化 | 第81页 |
| 5.1.9.6 一次水驱 | 第81页 |
| 5.1.9.7 注入驱油剂并二次水驱 | 第81-82页 |
| 5.1.9.8 驱油效果评价 | 第82页 |
| 5.2 结果与讨论 | 第82-93页 |
| 5.2.1 槐糖脂的发酵生产 | 第82-83页 |
| 5.2.2 驱油剂的制备 | 第83页 |
| 5.2.3 驱油剂的表面张力与界面张力比较 | 第83-84页 |
| 5.2.4 驱油剂的乳化能力比较 | 第84-85页 |
| 5.2.5 驱油剂和地层水的粘度比较 | 第85-86页 |
| 5.2.6 驱油剂的驱油效果物理模拟评价 | 第86-93页 |
| 5.3 本章小结 | 第93-94页 |
| 全文总结与展望 | 第94-96页 |
| 参考文献 | 第96-106页 |
| 攻读学位期间发表或撰写的学术论文及其他成果 | 第106-108页 |
| 致谢 | 第108-110页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第110页 |
