| 论文创新点 | 第5-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 第一部分 药用真菌北虫草转录组和蛋白质组研究 | 第15-104页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-27页 |
| 1.1 大型真菌基因组及转录组研究现状 | 第15-21页 |
| 1.1.1 大型真菌概况 | 第15-16页 |
| 1.1.2 大型真菌基因组研究概况 | 第16-19页 |
| 1.1.3 大型真菌转录组研究概况 | 第19-21页 |
| 1.2 大型真菌蛋白质组研究现状 | 第21-22页 |
| 1.3 大型真菌活性蛋白研究现状 | 第22-24页 |
| 1.4 北虫草研究现状 | 第24-27页 |
| 1.4.1 北虫草概况 | 第24页 |
| 1.4.2 北虫草的组学研究现状 | 第24-25页 |
| 1.4.3 北虫草活性物质研究现状 | 第25-27页 |
| 第二章 北虫草菌丝、子实体转录组分析 | 第27-56页 |
| 引言 | 第27页 |
| 2.1 实验材料试剂及溶液配方 | 第27-28页 |
| 2.1.1 样本准备 | 第27页 |
| 2.1.2 实验试剂及配方 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-29页 |
| 2.2.1 北虫草菌丝及子实体RNA提取 | 第28页 |
| 2.2.2 北虫草菌丝及子实体cDNA文库构建及测序 | 第28-29页 |
| 2.3 数据处理及分析方法 | 第29-31页 |
| 2.3.1 原始序列数据处理 | 第29-30页 |
| 2.3.2 序列比对 | 第30页 |
| 2.3.3 测序随机性分析 | 第30页 |
| 2.3.4 可变剪接以及新转录本分析 | 第30页 |
| 2.3.5 功能注释 | 第30页 |
| 2.3.6 差异表达分析 | 第30-31页 |
| 2.3.7 半定量PCR及定量PCR | 第31页 |
| 2.4 实验结果 | 第31-43页 |
| 2.4.1 北虫草菌丝及子实体转录组分析流程 | 第31-32页 |
| 2.4.2 与北虫草基因组进行序列比对 | 第32-34页 |
| 2.4.3 可变剪接以及新转录本预测 | 第34-35页 |
| 2.4.4 差异表达基因分析 | 第35-40页 |
| 2.4.5 虫草素代谢途径分析 | 第40-43页 |
| 2.5 讨论 | 第43-45页 |
| 2.5.1 北虫草转录组的基础分析 | 第43-44页 |
| 2.5.2 北虫草转录组的深入分析 | 第44-45页 |
| 2.6 本章小结 | 第45-56页 |
| 第三章 北虫草菌丝、子实体蛋白质组分析 | 第56-89页 |
| 引言 | 第56页 |
| 3.1 实验试剂及溶液配方 | 第56页 |
| 3.1.1 实验试剂 | 第56页 |
| 3.1.2 溶液配方 | 第56页 |
| 3.2 实验方法 | 第56-58页 |
| 3.2.1 北虫草菌丝及子实体蛋白提取 | 第56-57页 |
| 3.2.2 SDS-PAGE及胶内酶解 | 第57页 |
| 3.2.3 质谱检测 | 第57-58页 |
| 3.2.4 蛋白数据分析 | 第58页 |
| 3.3 实验结果 | 第58-65页 |
| 3.3.1 蛋白质组分析流程 | 第58-59页 |
| 3.3.2 蛋白质组鉴定 | 第59-60页 |
| 3.3.3 差异蛋白组分析 | 第60-65页 |
| 3.3.4 值得关注的活性蛋白分析 | 第65页 |
| 3.4 讨论 | 第65-66页 |
| 3.5 本章小结 | 第66-89页 |
| 第四章 北虫草生物活性蛋白天然纯化及原核表达 | 第89-104页 |
| 引言 | 第89页 |
| 4.1 实验材料试剂及溶液配方 | 第89-90页 |
| 4.1.1 实验材料试剂 | 第89页 |
| 4.1.2 溶液配方 | 第89-90页 |
| 4.3 实验方法 | 第90-96页 |
| 4.3.1 北虫草菌丝及子实体RNA反转录 | 第90-91页 |
| 4.3.2 PCR引物及酶切位点 | 第91页 |
| 4.3.3 PCR反应体系及条件 | 第91-92页 |
| 4.3.4 PCR产物和质粒酶切 | 第92-93页 |
| 4.3.5 连接体系及条件 | 第93页 |
| 4.3.6 DH5α感受态细胞的制备 | 第93页 |
| 4.3.7 连接产物转化 | 第93-94页 |
| 4.3.8 鉴定阳性克隆及保种 | 第94页 |
| 4.3.9 转化至表达菌株 | 第94页 |
| 4.3.10 GST融合蛋白的原核表达纯化 | 第94-95页 |
| 4.3.11 北虫草蛋白的天然纯化 | 第95页 |
| 4.3.12 蛋白血凝试验方法 | 第95页 |
| 4.3.13 抑制肿瘤细胞增殖实验 | 第95页 |
| 4.3.14 小鼠淋巴细胞分离 | 第95-96页 |
| 4.3.15 小鼠淋巴细胞增殖实验 | 第96页 |
| 4.4 实验结果 | 第96-102页 |
| 4.4.1 进行克隆及原核表达的基因信息 | 第96-97页 |
| 4.4.2 蛋白原核表达后纯化的结果 | 第97页 |
| 4.4.3 凝集素蛋白凝血活性检测 | 第97-98页 |
| 4.4.4 原核表达蛋白的抑制肿瘤细胞生长作用 | 第98-100页 |
| 4.4.5 原核表达蛋白体外刺激小鼠脾脏淋巴细胞增殖 | 第100页 |
| 4.4.6 北虫草蛋白的天然纯化 | 第100-102页 |
| 4.4.7 天然纯化蛋白的鉴定以及活性研究 | 第102页 |
| 4.5 讨论 | 第102-103页 |
| 4.5.1 克隆及原核表达基因的选择及研究 | 第102-103页 |
| 4.5.2 北虫草天然纯化蛋白的研究 | 第103页 |
| 4.6 本章小结 | 第103-104页 |
| 第二部分 凝集素AAL-2用于富集O-GlcNAc修饰蛋白/肽段及其检测方法研究 | 第104-149页 |
| 第五章 文献综述 | 第104-113页 |
| 5.1 O-G1cNAc糖基化修饰研究 | 第104-113页 |
| 5.1.1 糖基化修饰的概况 | 第104页 |
| 5.1.2 O-GlcNAc修饰与其他翻译后修饰的相互作用 | 第104-106页 |
| 5.1.3 O-GlcNAc修饰的功能研究 | 第106-110页 |
| 5.1.4 O-GlcNAc修饰的富集与鉴定 | 第110-113页 |
| 第六章 凝集素AAL-2富集O-GlcNAc修饰蛋白/肽段及其检测 | 第113-149页 |
| 引言 | 第113页 |
| 6.1 实验材料试剂及溶液配方 | 第113-114页 |
| 6.1.1 实验材料试剂 | 第113-114页 |
| 6.1.2 溶液配方 | 第114页 |
| 6.2 实验方法 | 第114-120页 |
| 6.2.1 凝集素AAL-2的天然纯化及原核表达纯化 | 第114-115页 |
| 6.2.2 凝集素AAL-2偶联的Sepharose 4B亲和层析柱的制备 | 第115页 |
| 6.2.3 凝集素AAL-2偶联的POROS AL层析柱的制备 | 第115-116页 |
| 6.2.4 细胞的核质分离 | 第116页 |
| 6.2.5 PNGase F酶切N-链接的糖修饰处理方法 | 第116页 |
| 6.2.6 小鼠Ⅰ型糖尿病模型建立 | 第116-117页 |
| 6.2.7 大鼠Ⅰ型糖尿病模型建立 | 第117页 |
| 6.2.8 小鼠和大鼠组织总蛋白提取 | 第117页 |
| 6.2.9 蛋白质印记Western blotting | 第117-118页 |
| 6.2.10 五种人工合成O-GlcNAc修饰标准肽段 | 第118页 |
| 6.2.11 蛋白酶解成肽段 | 第118页 |
| 6.2.12 肽段脱盐 | 第118-119页 |
| 6.2.13 MALDI-TOF-MS检测标准肽段及简单肽段 | 第119页 |
| 6.2.14 Sepharose 4B-AAL2层析柱富集复杂样品O-GlcNAc修饰蛋白 | 第119页 |
| 6.2.15 POROS AL-AAL2层析柱富集复杂样品O-GlcNAc修饰肽段 | 第119-120页 |
| 6.3 实验结果 | 第120-135页 |
| 6.3.1 人工合成标准肽段的纯度及分子量确认 | 第120页 |
| 6.3.2 不同的AAL-2亲和柱富集简单混合样品中的O-GlcNAc修饰肽段 | 第120-123页 |
| 6.3.3 POROS AL-AAL2富集O-GlcNAc修饰蛋白a-Crystallin中的O-GlcNAc修饰肽段 | 第123-125页 |
| 6.3.4 AAL-2富集细胞样品中O-GlcNAc修饰肽段及质谱鉴定 | 第125-126页 |
| 6.3.5 用于做富集实验的组织样品的确定 | 第126-130页 |
| 6.3.6 AAL-2富集糖尿病大鼠肝脏中O-GlcNAc修饰蛋白/肽段及质谱鉴定 | 第130-133页 |
| 6.3.7 AAL-2富集正常大鼠肝脏中O-GlcNAc修饰蛋白/肽段及质谱鉴定 | 第133-135页 |
| 6.4 讨论 | 第135-137页 |
| 6.4.1 AAL-2在富集O-GlcNAc修饰蛋白/肽段方面的优势 | 第135页 |
| 6.4.2 AAL-2富集O-GlcNAc修饰蛋白/肽段的方法探讨 | 第135-137页 |
| 6.5 本章小结 | 第137-149页 |
| 参考文献 | 第149-162页 |
| 攻博期间发表的文章成果目录 | 第162-163页 |
| 致谢 | 第163-165页 |
