| 摘要 | 第4-10页 |
| abstract | 第10-17页 |
| 英文缩略词表 | 第18-24页 |
| 前言 | 第24-27页 |
| 第一部分 白癜风患者外周血miRNAs的表达及靶基因预测和功能分析 | 第27-67页 |
| 1 引言 | 第27-28页 |
| 2 实验材料 | 第28-30页 |
| 2.1 一般资料 | 第28-29页 |
| 2.2 主要试剂 | 第29页 |
| 2.3 主要仪器 | 第29-30页 |
| 2.4 主要试剂配制 | 第30页 |
| 3 实验方法 | 第30-36页 |
| 3.1 白癜风患者外周血总RNA抽提和质量检测 | 第30-31页 |
| 3.2 芯片杂交 | 第31-32页 |
| 3.3 高通量测序数据分析和miRNAs靶基因预测 | 第32-33页 |
| 3.4 白癜风和正常皮肤组织切片miRNA的提取 | 第33页 |
| 3.5 RNA浓度和质量检测 | 第33页 |
| 3.6 miRNA反转录 | 第33-34页 |
| 3.7 实时荧光定量PCR检测皮肤组织miR2023p的表达 | 第34页 |
| 3.8 白癜风和正常皮肤组织Fontana-Masson银染观察黑素情况 | 第34-35页 |
| 3.9 免疫组化检测白癜风皮损组织和正常皮肤组织中YAP1蛋白的表达 | 第35页 |
| 3.10 免疫组化对照设置 | 第35-36页 |
| 3.11 阳性结果判定标准 | 第36页 |
| 3.12 统计学分析 | 第36页 |
| 4 结果 | 第36-60页 |
| 4.1 RNA质量检测结果 | 第36-37页 |
| 4.2 白癜风患者血清高通量测序结果 | 第37-40页 |
| 4.3 靶基因预测结果 | 第40-41页 |
| 4.4 miR2023p、miR-630、miR7663p和miR12383p介导的基因调控网络 | 第41-55页 |
| 4.5 GO富集和KEGG信号通路分析 | 第55-58页 |
| 4.6 qRT-PCR验证白癜风皮损组织中miRNA2023p表达结果 | 第58-59页 |
| 4.7 白癜风皮损组织和正常皮肤组织中Fontana-Masson银染结果 | 第59-60页 |
| 4.8 白癜风皮肤组织和正常皮肤组织中YAP1表达情况 | 第60页 |
| 5 讨论 | 第60-63页 |
| 6 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-67页 |
| 第二部分 过表达或沉默miR2023P对黑素细胞生物学功能的影响 | 第67-95页 |
| 1 引言 | 第67-68页 |
| 2 实验材料 | 第68-69页 |
| 2.1 细胞株 | 第68页 |
| 2.2 主要试剂 | 第68页 |
| 2.3 主要试剂配制 | 第68-69页 |
| 2.4 主要仪器 | 第69页 |
| 3 实验方法 | 第69-80页 |
| 3.1 miR2023p过表达载体构建 | 第69-73页 |
| 3.2 miR2023p干扰表达载体构建 | 第73-75页 |
| 3.3 慢病毒包装和感染黑素细胞株PIG1细胞 | 第75-77页 |
| 3.4 PIG1细胞稳定细胞系的冻存及复苏 | 第77-78页 |
| 3.5 实时荧光定量PCR检测miR2023p在各组细胞中的水平 | 第78页 |
| 3.6 MTT法检测miR2023p对黑素细胞株PIG1细胞增殖能力的影响 | 第78页 |
| 3.7 流式细胞术检测miR2023p对黑素细胞株PIG1细胞凋亡的影响 | 第78-79页 |
| 3.8 多巴氧化法检测miR2023p对黑素细胞株PIG1酪氨酸酶活性的影响 | 第79页 |
| 3.9 氢氧化钠裂解法测定miR2023p对黑素细胞株PIG1细胞黑素含量的影响 | 第79页 |
| 3.10 经纤维连接蛋白包被的培养板测定miR2023p对黑素细胞株PIG1细胞黏附率的影响 | 第79-80页 |
| 3.11 统计学分析 | 第80页 |
| 4 结果 | 第80-90页 |
| 4.1 miR2023p过表达慢病毒载体构建结果 | 第80-81页 |
| 4.2 重组质粒pLenti-miR2023p序列测定 | 第81页 |
| 4.3 miR2023p干扰表达慢病毒载体构建 | 第81-83页 |
| 4.4 重组质粒pLenti-si-miR2023p序列测定 | 第83页 |
| 4.5 慢病毒包装结果 | 第83-84页 |
| 4.6 稳定PIG1-miR-202 和PIG1-si-miR2023p细胞系的筛选 | 第84-87页 |
| 4.7 miR2023p对黑素细胞株PIG1细胞增殖的影响 | 第87页 |
| 4.8 miR2023p对黑素细胞株PIG1细胞凋亡的影响 | 第87-88页 |
| 4.9 miR2023p对黑素细胞株PIG1细胞酪氨酸酶活性和黑素合成的影响 | 第88-89页 |
| 4.10 miR2023p对黑素细胞株PIG1细胞黏附率的影响 | 第89-90页 |
| 5 讨论 | 第90-92页 |
| 6 结论 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-95页 |
| 第三部分 miR2023p对黑素细胞生物学影响的机制研究 | 第95-116页 |
| 1 引言 | 第95-96页 |
| 2 实验材料 | 第96-99页 |
| 2.1 细胞株 | 第96页 |
| 2.2 主要试剂 | 第96页 |
| 2.3 主要试剂配制 | 第96-99页 |
| 2.4 主要仪器 | 第99页 |
| 3 实验方法 | 第99-105页 |
| 3.1 双荧光素酶报告基因载体构建 | 第99-101页 |
| 3.2 双荧光素酶报告实验 | 第101-102页 |
| 3.3 实时荧光定量PCR检测YAP1、p73和PUMA的表达水平 | 第102页 |
| 3.4 Western blot检测YAP1、p73和PUMA蛋白表达水平 | 第102-105页 |
| 3.5 统计分析 | 第105页 |
| 4 结果 | 第105-111页 |
| 4.1 miR2023p靶基因预测 | 第105页 |
| 4.2 靶基因 3’UTR序列的荧光素酶报告基因载体构建 | 第105-107页 |
| 4.3 重组质粒测序结果 | 第107-108页 |
| 4.4 双荧光素酶报告基因检测结果 | 第108-109页 |
| 4.5 qRT-PCR检测黑素细胞PIG1中YAP1、p73和PUMA的表达 | 第109-110页 |
| 4.6 Western blot检测黑素细胞PIG1中YAP1、p73和PUMA蛋白的表达 | 第110-111页 |
| 5 讨论 | 第111-113页 |
| 6 结论 | 第113-114页 |
| 参考文献 | 第114-116页 |
| 全文总结 | 第116-117页 |
| 综述 白癜风研究现状及其与miRNAs关系的研究进展 | 第117-137页 |
| 参考文献 | 第129-137页 |
| 个人简历及在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第137-138页 |
| 致谢 | 第138页 |
