| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略表 | 第11-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-20页 |
| 1 细胞分化与肿瘤形成 | 第12页 |
| 2 Purα背景 | 第12-15页 |
| 2.1 Purα的结构 | 第12-13页 |
| 2.2 Purα的功能 | 第13-15页 |
| 2.2.1 调节基因转录 | 第13-14页 |
| 2.2.2 调控细胞周期和致癌性转化 | 第14页 |
| 2.2.3 mRNA的转运和翻译 | 第14页 |
| 2.2.4 DNA修复 | 第14-15页 |
| 3 串联亲和纯化技术 | 第15-17页 |
| 3.1 串联亲和纯化概述 | 第15-16页 |
| 3.2 串联亲和纯化的实验室应用 | 第16-17页 |
| 4 RNA干扰 | 第17-19页 |
| 4.1 RNA干扰的概念及机制 | 第17-18页 |
| 4.2 RNA干扰的实验室应用 | 第18-19页 |
| 5 研究目的和意义 | 第19-20页 |
| 第二章 串联亲和纯化研究Purα蛋白质复合体组分 | 第20-40页 |
| 1 实验材料 | 第20-23页 |
| 1.1 主要仪器及试剂 | 第20-22页 |
| 1.1.1 主要仪器设备 | 第20-21页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第21-22页 |
| 1.2 生物材料 | 第22页 |
| 1.3 分析软件 | 第22页 |
| 1.4 主要溶液配制 | 第22-23页 |
| 2 实验方法 | 第23-30页 |
| 2.1 引物设计 | 第23页 |
| 2.2 TRIZOL试剂提取RNA | 第23-24页 |
| 2.3 RNA纯度,浓度鉴定 | 第24页 |
| 2.3.1 RNA纯度鉴定 | 第24页 |
| 2.3.2 RNA变性电泳 | 第24页 |
| 2.3.3 RNA浓度和纯度 | 第24页 |
| 2.4 RT-PCR | 第24-25页 |
| 2.4.1 合成第一链cDNA | 第24页 |
| 2.4.2 PCR扩增PURA基因 | 第24-25页 |
| 2.5 PCR产物回收 | 第25页 |
| 2.6 EcoR I和BamH I双酶切 | 第25页 |
| 2.7 酶切产物胶回收 | 第25页 |
| 2.8 连接 | 第25-26页 |
| 2.9 感受态制备 | 第26页 |
| 2.10 转化 | 第26页 |
| 2.11 双酶切鉴定 | 第26-27页 |
| 2.12 测序鉴定 | 第27页 |
| 2.13 N-TAP-PURA重组蛋白的表达 | 第27-28页 |
| 2.13.1 细胞培养 | 第27页 |
| 2.13.2 N-TAP-PURA质粒扩增 | 第27页 |
| 2.13.3 细胞转染 | 第27页 |
| 2.13.4 免疫印迹(Western Blot) | 第27-28页 |
| 2.14 串联亲和纯化分析Purα蛋白质复合体组分 | 第28-30页 |
| 2.14.1 串联亲和纯化 | 第28-29页 |
| 2.14.2 银染及图像分析 | 第29页 |
| 2.14.3 胶内酶解 | 第29-30页 |
| 2.14.4 点靶 | 第30页 |
| 2.14.5 MALDI-TOF/TOF质谱鉴定和数据库搜索 | 第30页 |
| 3 实验结果 | 第30-36页 |
| 3.1 N-TAP-PURA载体构建 | 第30-32页 |
| 3.2 融合蛋白N-TAP-PURA的表达及鉴定 | 第32页 |
| 3.3 串联亲和纯化分离Purα蛋白复合体 | 第32-34页 |
| 3.4 质谱结果 | 第34-36页 |
| 4 讨论 | 第36-40页 |
| 第三章 Purα低表达细胞株的构建 | 第40-49页 |
| 1 实验材料 | 第40-42页 |
| 1.1 主要仪器及试剂 | 第40-41页 |
| 1.1.1 主要仪器设备 | 第40页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第40-41页 |
| 1.2 生物材料 | 第41页 |
| 1.3 主要溶液配制 | 第41-42页 |
| 2 实验方法 | 第42-44页 |
| 2.1 质粒扩增 | 第42页 |
| 2.2 构建Purα低表达细胞株 | 第42-44页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第42-43页 |
| 2.2.2 包装病毒 | 第43页 |
| 2.2.3 病毒浓缩 | 第43页 |
| 2.2.4 侵染293T和Hela细胞系 | 第43页 |
| 2.2.5 抗生素筛选稳定株 | 第43-44页 |
| 2.3 免疫印迹(Western Blot) | 第44页 |
| 2.4 MTT实验检测Purα低表达对Hela细胞活力影响 | 第44页 |
| 2.5 MTT实验检测Purα低表达对MMS处理后Hela细胞敏感性影响 | 第44页 |
| 3 实验结果 | 第44-48页 |
| 3.1 Western Blot验证RNA干扰效果 | 第44-45页 |
| 3.2 Purα低表达对Hela细胞活力影响 | 第45-46页 |
| 3.3 Purα低表达对MMS处理后Hela细胞敏感性影响 | 第46-48页 |
| 4 讨论 | 第48-49页 |
| 第四章 结论与展望 | 第49-50页 |
| 1 结论 | 第49页 |
| 2 展望 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 发表论文情况 | 第58-59页 |
| 附录 | 第59-80页 |
