| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略表 | 第14-16页 |
| 第一章 绪言 | 第16-31页 |
| 1.1 TRAIL凋亡耐受关键蛋白：c-FLIP | 第17-18页 |
| 1.2 c-FLIP结构 | 第18-19页 |
| 1.3 c-FLIP表达调控及降解 | 第19-21页 |
| 1.3.1 c-FLIP的转录翻译调控 | 第19-20页 |
| 1.3.2 c-FLIP的翻译后修饰及降解 | 第20-21页 |
| 1.4 c-FLIP与细胞死亡信号 | 第21-25页 |
| 1.4.1 c-FLIP与凋亡 | 第21-23页 |
| 1.4.2 c-FLIP与坏死 | 第23-24页 |
| 1.4.3 c-FLIP与自噬 | 第24-25页 |
| 1.5 c-FLIP与细胞存活信号 | 第25-27页 |
| 1.5.1 c-FLIP活化NF-κB信号 | 第25-27页 |
| 1.5.2 c-FLIP与MAPK信号 | 第27页 |
| 1.5.3 c-FLIP与Wnt信号 | 第27页 |
| 1.6 c-FLIP与胚胎发育及机体病变 | 第27-28页 |
| 1.7 c-FLIP与癌症治疗 | 第28-29页 |
| 1.8 研究目的及意义 | 第29-31页 |
| 第二章 TRAIL诱导细胞凋亡的耐受性机制研究 | 第31-53页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第33-36页 |
| 2.1.1 材料 | 第33-35页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第35-36页 |
| 2.2 主要溶液及配制 | 第36-38页 |
| 2.3 实验方法 | 第38-42页 |
| 2.3.1 肿瘤细胞系的培养与原代细胞的培养 | 第38-40页 |
| 2.3.2 MTT检测法 | 第40页 |
| 2.3.3 制备细胞裂解液 | 第40-41页 |
| 2.3.4 蛋白定量及样品准备 | 第41页 |
| 2.3.5 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第41-42页 |
| 2.3.6 免疫印迹 | 第42页 |
| 2.4 实验结果 | 第42-49页 |
| 2.4.1 单独给药不同细胞株的生长抑制 | 第42-45页 |
| 2.4.2 TRAIL联合Roc与AT 406给药不同细胞株的生长抑制 | 第45-49页 |
| 2.5 讨论 | 第49-52页 |
| 2.6 小结 | 第52-53页 |
| 第三章 稳定表达c-FLIP_s-EGFP表达载体的构建 | 第53-77页 |
| 3.1 材料和方法 | 第54-56页 |
| 3.1.1 材料 | 第54-56页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第56页 |
| 3.2 主要溶液及配制 | 第56-57页 |
| 3.3 实验方法 | 第57-67页 |
| 3.3.1 目的序列c-FLIPs的获取 | 第57-61页 |
| 3.3.2 c-FLIP_s-EGFP真核表达载体的构建 | 第61-65页 |
| 3.3.3 c-FLIP_s-EGFP的真核细胞转染 | 第65-67页 |
| 3.4 实验结果 | 第67-75页 |
| 3.4.1 c-FLIP_s序列扩增 | 第67页 |
| 3.4.2 菌落PCR鉴定c-FLIP_s-pEGFP-N2/DH5α | 第67-68页 |
| 3.4.3 测序结果 | 第68-71页 |
| 3.4.4 重组质粒c-FLIP_s和pEGFP-N2酶切鉴定 | 第71-72页 |
| 3.4.5 确定G418的最佳筛选浓度 | 第72页 |
| 3.4.6 确定DNA/转染试剂比例 | 第72-73页 |
| 3.4.7 转染细胞的筛选 | 第73-75页 |
| 3.5 讨论 | 第75-76页 |
| 3.6 小结 | 第76-77页 |
| 第四章 总结与展望 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-83页 |
| 附录A | 第83页 |
