| 摘要 | 第4-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-37页 |
| 1 植物CMS败育机理的研究 | 第14-25页 |
| 1.1 玉米CMS的胞质分类 | 第14-15页 |
| 1.2 玉米CMS的细胞学研究 | 第15-16页 |
| 1.3 CMS的生理生化水平研究 | 第16-19页 |
| 1.3.1 营养物质与细胞质雄性不育 | 第16页 |
| 1.3.2 植物激素与细胞质雄性不育 | 第16-17页 |
| 1.3.3 同工酶与细胞质雄性不育 | 第17-18页 |
| 1.3.4 活性氧与细胞质雄性不育 | 第18-19页 |
| 1.4 细胞质雄性不育的分子水平研究 | 第19-24页 |
| 1.4.1 mtDNA重组与CMS | 第20-22页 |
| 1.4.2 mtRNA的加工与CMS | 第22-23页 |
| 1.4.3 核质互作与CMS | 第23-24页 |
| 1.5 与植物细胞质雄性不育相关的几种假说 | 第24-25页 |
| 1.5.1 毒性假说 | 第24-25页 |
| 1.5.2 代谢假说 | 第25页 |
| 2 植物细胞质雄性不育育性恢复机理 | 第25-30页 |
| 2.1 恢复基因对线粒体DNA结构的影响 | 第25-26页 |
| 2.2 恢复基因对线粒体嵌合基因转录本的影响 | 第26-27页 |
| 2.3 恢复基因对不育相关基因RNA编辑的影响 | 第27-28页 |
| 2.4 玉米C型胞质育性恢复的研究进展 | 第28-30页 |
| 3 RNA的选择性剪接 | 第30-34页 |
| 3.1 选择性剪接的检测方法 | 第31-32页 |
| 3.1.1 表达标签序列测序和生物信息学 | 第31页 |
| 3.1.2 生物芯片法 | 第31页 |
| 3.1.3 RT-PCR法 | 第31-32页 |
| 3.2 RNA选择性反式剪接 | 第32-33页 |
| 3.3 RNA的选择性剪接与编辑 | 第33-34页 |
| 4 本研究的目的与意义 | 第34-36页 |
| 5 技术路线 | 第36-37页 |
| 第二章 玉米CMS-C育性相关线粒体基因的表达分析 | 第37-58页 |
| 2.1 材料 | 第37页 |
| 2.2 方法 | 第37-41页 |
| 2.2.1 不同发育时期花药的收集 | 第37-38页 |
| 2.2.2 总RNA提取 | 第38页 |
| 2.2.3 cDNA第一链合成 | 第38-39页 |
| 2.2.4 荧光定量RT-PCR扩增 | 第39-40页 |
| 2.2.5 qRT-PCR标准品的制备 | 第40页 |
| 2.2.6 qRT-PCR反应 | 第40-41页 |
| 2.2.7 qRT-PCR数据分析 | 第41页 |
| 2.3 结果与分析 | 第41-57页 |
| 2.3.1 RNA的检测 | 第41-43页 |
| 2.3.2 CMS-C育性相关线粒体基因的表达量分析 | 第43-57页 |
| 2.3.2.1 溶解曲线及标准曲线分析 | 第43-46页 |
| 2.3.2.2 CMS相关基因在各个发育时期不同材料间的表达模式分析 | 第46-53页 |
| 2.3.2.3 CMS相关基因在同一材料不同发育时期的表达模式分析 | 第53-57页 |
| 2.4 讨论 | 第57-58页 |
| 第三章 ATP6基因在正常胞质和C胞质中的克隆及表达分析 | 第58-80页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第59-60页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第59页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第59-60页 |
| 3.2 方法 | 第60-64页 |
| 3.2.1 线粒体的分离 | 第60页 |
| 3.2.2 线粒体DNA的提取 | 第60-61页 |
| 3.2.3 线粒体RNA的提取 | 第61页 |
| 3.2.4 cDNA第一链合成 | 第61页 |
| 3.2.5 PCR扩增 | 第61-62页 |
| 3.2.6 目的片段的回收与纯化 | 第62-63页 |
| 3.2.7 目的片段与克隆载体的连接 | 第63页 |
| 3.2.8 感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第63页 |
| 3.2.9 质粒DNA的转化(热击法) | 第63-64页 |
| 3.2.10 重组菌落的PCR鉴定 | 第64页 |
| 3.2.11 半定量RT-PCR反应 | 第64页 |
| 3.3 结果与分析 | 第64-77页 |
| 3.3.1 线粒体DNA检测 | 第64-65页 |
| 3.3.2 线粒体RNA检测 | 第65-66页 |
| 3.3.3 嵌合atp6-c基因在线粒体DNA及RNA水平上的分析 | 第66页 |
| 3.3.4 正常atp6-n基因在所有材料的DNA及RNA扩增 | 第66-68页 |
| 3.3.5 产物的回收克隆测序 | 第68-72页 |
| 3.3.6 atp6基因编码蛋白的性质及结构预测 | 第72-77页 |
| 3.3.7 半定量分析atp6基因在不育系和保持系中的表述情况 | 第77页 |
| 3.4 讨论 | 第77-80页 |
| 第四章 线粒体ATP6基因的RNA编辑 | 第80-97页 |
| 4.1 材料 | 第80-81页 |
| 4.2 方法 | 第81-82页 |
| 4.2.1 幼穗线粒体DNA及RNA的提取 | 第81页 |
| 4.2.2 cDNA第一链的合成(与2.2.3相同) | 第81页 |
| 4.2.3 mtDNA及cDNA特异引物PCR扩增 | 第81-82页 |
| 4.2.4 回收、测序及编辑频率和转录本概率的计算 | 第82页 |
| 4.3 结果分析 | 第82-95页 |
| 4.3.1 atp6-n与atp6-c基因保守序列的RNA编辑 | 第82-86页 |
| 4.3.2 atp6-n基因P9P10区域RNA编辑 | 第86-91页 |
| 4.3.3 atp6-c基因P7P8区域的RNA编辑 | 第91-94页 |
| 4.3.4 cox2-c基因5'端UTR区域的RNA编辑 | 第94-95页 |
| 4.4 讨论 | 第95-97页 |
| 第五章 玉米线粒体ATP6-C基因的原核表达 | 第97-110页 |
| 5.1 材料 | 第97-98页 |
| 5.2 方法 | 第98-102页 |
| 5.2.1 原核表达所用引物 | 第98页 |
| 5.2.2 目的片段的扩增 | 第98-99页 |
| 5.2.3 目的片段的回收,连接及转化 | 第99页 |
| 5.2.4 重组菌落的PCR鉴定 | 第99页 |
| 5.2.5 质粒提取 | 第99页 |
| 5.2.6 表达载体与重组质粒的双酶切和回收 | 第99-100页 |
| 5.2.7 目的片段与表达载体的连接、转化及检测 | 第100页 |
| 5.2.8 目的蛋白诱导条件的优化及菌体诱导曲线的检测 | 第100-101页 |
| 5.2.9 SDS-PAGE检测蛋白的表达情况 | 第101-102页 |
| 5.3 结果与分析 | 第102-108页 |
| 5.3.1 目的基因克隆 | 第102页 |
| 5.3.2 pMD-19-T阳性克隆的检测 | 第102-103页 |
| 5.3.3 目的片段及表达载体的双酶切检测 | 第103-105页 |
| 5.3.4 原核表达载体的阳性克隆检测 | 第105页 |
| 5.3.5 原核表达载体菌体诱导曲线 | 第105-106页 |
| 5.3.6 SDS-PAGE检测 | 第106-108页 |
| 5.4 讨论 | 第108-110页 |
| 第六章 全文总结 | 第110-112页 |
| 参考文献 | 第112-127页 |
| 附：原核表达載体pGEX-6p-l图谱 | 第127-130页 |
| 致谢 | 第130-131页 |
| 在读期间发表和待发表论文情况 | 第131页 |
