致谢 | 第5-7页 |
中文摘要 | 第7-9页 |
Abstract | 第9-11页 |
缩略词表 | 第12-15页 |
1. 引言 | 第15-19页 |
2. 材料和方法 | 第19-51页 |
2.1 细胞培养 | 第19页 |
2.2 质粒 | 第19-25页 |
2.3 质粒的抽提 | 第25-27页 |
2.4 细胞转染 | 第27-28页 |
2.5 构建稳转株细胞 | 第28-29页 |
2.6 活细胞成像及激光微辐射 | 第29-33页 |
2.7 蛋白表达纯化 | 第33-36页 |
2.8 核蛋白提取和Western Blot | 第36-42页 |
2.9 免疫共沉淀(Immunoprecipitation,IP)及体外结合实验 | 第42-44页 |
2.10 体外酶活性实验 | 第44-46页 |
2.11 RPA及Rad51的荧光免疫染色 | 第46-47页 |
2.12 激光划痕及免疫荧光 | 第47-48页 |
2.13 流式细胞检测 | 第48-49页 |
2.14 IR敏感性试验 | 第49-51页 |
3. 实验结果 | 第51-81页 |
3.1 DNA-PKcs在S期和非S期都可聚集到DNA损伤位点 | 第51-54页 |
3.2 DNA-PKcs 2056 的自磷酸化水平在S期降低 | 第54-56页 |
3.3 BRCA1抑制DNA-PKcs S2056在S期的自磷酸化 | 第56-59页 |
3.4 BRCA1和DNA-PKcs存在相互作用 | 第59-61页 |
3.5 BRCA1和DNA-PKcs的相互作用具有细胞周期依赖性 | 第61-62页 |
3.6 BRCA1的羧基端与DNA-PKcs相互作用 | 第62-64页 |
3.7 DNA-PKcs特异性地与BRCA1的BRCT结构域发生相互作用 | 第64-65页 |
3.8 BRCA1的BRCT结构域与DNA-PKcs的氨基端S2056簇附近发生相互作用 | 第65-68页 |
3.9 BRCA1的BRCT结构域与DNA-PKcs的相互作用是非磷酸化依赖的 | 第68-70页 |
3.10 BRCA1在体内和体外抑制DNA-PKcs S2056的自磷酸化 | 第70-74页 |
3.11 抑制DNA-PKcs S2056簇的磷酸化可增加细胞的辐射敏感性并促进HR修复通路的发生 | 第74-81页 |
4. 讨论 | 第81-86页 |
5. 结论 | 第86-87页 |
参考文献 | 第87-96页 |
综述 | 第96-114页 |
参考文献 | 第104-114页 |
作者简历及所取得的科研成果 | 第114页 |