| 摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 1.前言 | 第11-16页 |
| 1.1 miRNAs的生成、作用机制和调控功能 | 第11-12页 |
| 1.2 垂体激素分泌相关miRNAs研究概况 | 第12-14页 |
| 1.3 营养物质对垂体生长激素的影响 | 第14-15页 |
| 1.4 营养物质对miRNAs表达的影响 | 第15-16页 |
| 1.5 研究目的和意义 | 第16页 |
| 2 材料与方法 | 第16-33页 |
| 2.1 主要仪器设备 | 第16-17页 |
| 2.2 试剂与用品 | 第17-20页 |
| 2.2.1 试剂 | 第17页 |
| 2.2.2 实验耗材 | 第17-18页 |
| 2.2.3 实验用品的清洗与消毒 | 第18页 |
| 2.2.4 主要试剂的配制 | 第18-20页 |
| 2.3 实验动物 | 第20页 |
| 2.4 质粒、菌株及细胞系 | 第20页 |
| 2.5 实验方法 | 第20-33页 |
| 2.5.1 GH3细胞的培养、传代 | 第20-21页 |
| 2.5.2 精氨酸处理GH3细胞 | 第21页 |
| 2.5.3 视黄酸处理GH3细胞 | 第21-22页 |
| 2.5.4 GH3细胞RNA的提取 | 第22页 |
| 2.5.5 总RNA中痕量DNA的消化 | 第22-23页 |
| 2.5.6 样品mRNA的反转录 | 第23页 |
| 2.5.7 目的基因的PCR扩增 | 第23-24页 |
| 2.5.8 实时荧光定量PCR检测 | 第24-25页 |
| 2.5.9 大鼠饲喂视黄酸试验 | 第25-28页 |
| 2.5.10 大鼠SOCS7、MKNK2和ABHD8基因克隆载体构建 | 第28-30页 |
| 2.5.11 大鼠SOCS7、MKNK2和ABHD8基因真核过表达载体构建 | 第30-32页 |
| 2.5.12 大鼠SOCS7和MKNK2基因在GH3细胞的功能研究 | 第32-33页 |
| 2.6 数据分析 | 第33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-50页 |
| 3.1 SD大鼠miR-7a-5p、miR3753p、miR1413p及miR-709组织特异性表达检测 | 第33-34页 |
| 3.2 精氨酸处理GH3细胞对垂体相关基因的影响 | 第34-37页 |
| 3.2.1 精氨酸处理后GH3细胞的RNA抽提结果 | 第34-35页 |
| 3.2.2 精氨酸处理GH3细胞对垂体生长相关miRNAs表达的影响 | 第35-36页 |
| 3.2.3 精氨酸处理GH3细胞对GH1和PIT1基因表达的影响 | 第36-37页 |
| 3.3 视黄酸处理GH3细胞对垂体相关基因的影响 | 第37-40页 |
| 3.3.1 视黄酸处理GH3细胞对垂体生长相关miRNAs表达的影响 | 第37-38页 |
| 3.3.2 视黄酸处理GH3细胞对GH1和PIT1基因表达的影响 | 第38-39页 |
| 3.3.3 视黄酸处理GH3细胞对RARα、SOCS7和MKNK2基因表达的影响 | 第39-40页 |
| 3.4 视黄酸饲喂SD大鼠试验 | 第40-45页 |
| 3.4.1 大鼠体重及采食量变化 | 第41-42页 |
| 3.4.2 大鼠血清IGF-1 变化 | 第42页 |
| 3.4.3 大鼠垂体组织RNA抽提结果 | 第42-43页 |
| 3.4.4 视黄酸对大鼠垂体生长相关miRNAs表达的影响 | 第43页 |
| 3.4.5 视黄酸对大鼠垂体GH1和PIT1基因表达的影响 | 第43-44页 |
| 3.4.6 视黄酸对大鼠垂体RARα、MKNK2和SOCS7基因表达的影响 | 第44-45页 |
| 3.5 靶基因真核过表达载体的构建 | 第45-48页 |
| 3.5.1 ABHD8和MKNK2基因克隆载体构建 | 第45-46页 |
| 3.5.2 SOCS7基因克隆载体构建 | 第46-47页 |
| 3.5.3 靶基因的CDs区扩增及真核表达载体构建 | 第47-48页 |
| 3.5.4 含有目的基因的真核表达载体鉴定 | 第48页 |
| 3.6 靶基因过表达载体在GH3细胞功能验证 | 第48-50页 |
| 3.6.1 pcDNA3.1-SOCS7过表达载体验证结果 | 第48-49页 |
| 3.6.2 pcDNA3.1-MKNK2过表达载体验证结果 | 第49-50页 |
| 4 讨论与结论 | 第50-58页 |
| 4.1 讨论 | 第50-57页 |
| 4.1.1 miRNAs的实时荧光定量PCR检测 | 第50-51页 |
| 4.1.2 精氨酸对大鼠垂体miRNAs及GH表达的影响 | 第51-52页 |
| 4.1.3 视黄酸对大鼠垂体miRNAs及GH表达的影响 | 第52-54页 |
| 4.1.4 视黄酸对大鼠体重及IGF-1 的影响 | 第54-55页 |
| 4.1.5 SOCS7及MKNK2对GH的作用 | 第55-57页 |
| 4.2 结论 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-68页 |
| 附录 | 第68-72页 |
