| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 英文缩写符号说明 | 第10-11页 |
| 第一部分 前言 | 第11-23页 |
| 1 骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP) | 第11-14页 |
| ·BMP家族 | 第11页 |
| ·BMP-2基因的结构 | 第11-12页 |
| ·BMPs的信号通路 | 第12-13页 |
| ·BMP-2在骨形成中的作用 | 第13-14页 |
| 2 AdEasy载体系统的介绍 | 第14-17页 |
| ·AdEasy系统的简介 | 第14-15页 |
| ·重组腺病毒构建过程 | 第15页 |
| ·AdEasy系统的质粒介绍 | 第15-16页 |
| ·选择使用该系统时应该注意以下问题 | 第16-17页 |
| 3 染色质重塑 | 第17页 |
| 4 BRG1的研究进展 | 第17-20页 |
| ·BRG1基因的结构和BRG1蛋白结构域 | 第18页 |
| ·BRG1复合物及相互作用蛋白 | 第18-20页 |
| ·BRG1的生物学作用 | 第20页 |
| 5 研究内容及意义 | 第20-21页 |
| ·研究内容 | 第20-21页 |
| ·研究目的和意义 | 第21页 |
| 6 研究的创新点 | 第21-22页 |
| 7 研究思路 | 第22-23页 |
| 第二部分 实验仪器和材料 | 第23-33页 |
| 1 材料 | 第23-31页 |
| ·动物 | 第23页 |
| ·细胞株、细菌和质粒 | 第23页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第23-25页 |
| ·常用试剂配方 | 第25-31页 |
| 2 仪器与设备 | 第31-33页 |
| 第三部分 实验方法 | 第33-54页 |
| 1 细胞的原代培养 | 第33页 |
| ·细胞传代 | 第33页 |
| 2 成骨细胞的BMP2诱导 | 第33页 |
| 3 Brg1的干扰实验 | 第33-34页 |
| 4 Dlx5基因的重组腺病毒载体的构建 | 第34-47页 |
| ·基因组抽提 | 第34-35页 |
| ·Dlx5基因的体外扩增 | 第35-36页 |
| ·PCR扩增 | 第35-36页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳及目的带的回收 | 第36页 |
| ·切胶回收 | 第36页 |
| ·腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV的扩增 | 第36-37页 |
| ·Dlx5基因和腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV进行酶切、连接反应 | 第37-38页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态的制备及CaCl_2转化 | 第38-39页 |
| ·单克隆的酶切鉴定 | 第39页 |
| ·重组腺病毒质粒Ad-Dlx5的构建 | 第39-41页 |
| ·重组腺病毒颗粒的包装、扩增及收集 | 第41-46页 |
| ·重组腺病毒载体的PCR鉴定 | 第46-47页 |
| 5 成骨细胞的感染 | 第47页 |
| 6 RT-PCR | 第47-51页 |
| ·引物的设计 | 第47-48页 |
| ·总RNA抽提 | 第48页 |
| ·使用DNase Ⅰ(RNase free)处理总RNA,去除基因组DNA | 第48-49页 |
| ·总RNA浓度、纯度和完整性分析 | 第49页 |
| ·逆转录PCR | 第49-50页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第50-51页 |
| 7 免疫印迹 | 第51-53页 |
| ·蛋白质样品的制备 | 第51页 |
| ·蛋白定量 | 第51-52页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第52-53页 |
| ·Western Blotting免疫印记法 | 第53页 |
| 8 钙骨法染色检测成骨分化情况 | 第53-54页 |
| 第四部分 结果与分析 | 第54-63页 |
| 1 Dlx5基因的重组腺病毒载体的构建 | 第54-56页 |
| ·pAdTrack-Dlx5穿梭质粒的构建 | 第54-55页 |
| ·Dlx5腺病毒重组载体的构建 | 第55-56页 |
| 2 重组腺病毒颗粒的包装、扩增及收集 | 第56-59页 |
| ·正常的293A细胞 | 第56-57页 |
| ·重组腺病毒载体转染的293A细胞的绿色荧光照片 | 第57-58页 |
| ·腺病毒滴度 | 第58页 |
| ·转染的293A细胞裂解的PCR结果 | 第58-59页 |
| 3 BMP-2诱导人间充质干细胞的成骨分化 | 第59-60页 |
| 4 BMP-2诱导Brgl转录的时间动力学分析 | 第60页 |
| 5 敲除Brg1抑制BMP-2诱导的成骨分化 | 第60-61页 |
| 6 Brg1能调控Dlx5的表达水平 | 第61-63页 |
| 第五部分 讨论 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-69页 |
| 附1: 使用AdEasy系统构建重组腺病毒的过程 | 第69-70页 |
| 附2: pAdTrack-Dlx5测序峰 | 第70-72页 |
| 在校期间发表论文情况 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
