评价皮肤刺激性候选蛋白标记物的筛选及蛋白信号转导通路的初步研究
| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 目录 | 第6-8页 |
| 第一章 前言 | 第8-13页 |
| 1 角质细胞与体外替代模型 | 第8-9页 |
| 2 皮肤刺激性评价指标 | 第9-11页 |
| ·细胞活性检测 | 第9-10页 |
| ·炎症介质 | 第10页 |
| ·其它指标 | 第10-11页 |
| 3 体外评价皮肤刺激的新生标志物 | 第11-13页 |
| 第二章 技术路线 | 第13-14页 |
| 第三章 材料与方法 | 第14-35页 |
| 第一节 差异表达蛋白的鉴定 | 第14-25页 |
| ·主要材料 | 第14页 |
| ·皮肤组织 | 第14页 |
| ·主要试剂 | 第14-16页 |
| ·细胞的提取 | 第14页 |
| ·细胞培养 | 第14页 |
| ·细胞处理与收集 | 第14-15页 |
| ·双向电泳 | 第15页 |
| ·质谱鉴定试剂 | 第15-16页 |
| ·试剂配制 | 第16-20页 |
| ·细胞提取及培养试剂配制 | 第16页 |
| ·蛋白提取试剂配制 | 第16-17页 |
| ·双向电泳试剂配制 | 第17-19页 |
| ·银染染色液(每块胶用量) | 第19页 |
| ·蛋白质酶解溶液 | 第19-20页 |
| ·质谱上样溶液 | 第20页 |
| ·实验方法 | 第20-25页 |
| ·原代角质细胞的提取 | 第20页 |
| ·细胞培养 | 第20-21页 |
| ·细胞处理 | 第21页 |
| ·细胞收集 | 第21页 |
| ·细胞裂解和总蛋白提取 | 第21页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第21-22页 |
| ·二维电泳 | 第22-24页 |
| ·图像扫描与分析 | 第24页 |
| ·蛋白质酶解 | 第24页 |
| ·质谱鉴定 | 第24-25页 |
| 第二节 差异表达蛋白的验证 | 第25-31页 |
| ·主要试剂 | 第25-26页 |
| ·Real time RT-PCR试剂 | 第25页 |
| ·免疫荧光试剂 | 第25页 |
| ·ELISA检测试剂 | 第25页 |
| ·Western-blot试剂 | 第25-26页 |
| ·生物信息学软件 | 第26页 |
| ·主要仪器 | 第26-27页 |
| ·试剂配方 | 第27-28页 |
| ·Western blot试剂 | 第27-28页 |
| ·实验方法 | 第28-31页 |
| ·差异表达蛋白质相互作用网络图 | 第28页 |
| ·Real time RT-PCR | 第28-29页 |
| ·免疫荧光 | 第29-30页 |
| ·ELISA检测IL-1α浓度 | 第30-31页 |
| 第三节 HSP27与CFL-1相互作用机制的研究 | 第31-35页 |
| ·主要材料 | 第31页 |
| ·HSP27干扰片段 | 第31页 |
| ·主要试剂 | 第31页 |
| ·RNAi试剂 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-35页 |
| ·HSP27 RNAi | 第31-32页 |
| ·Western blot | 第32-34页 |
| ·统计学处理 | 第34-35页 |
| 第四章 结果 | 第35-51页 |
| 第一节 差异表达蛋白的鉴定 | 第35-40页 |
| ·二维电泳图 | 第35-38页 |
| ·质谱鉴定结果 | 第38-40页 |
| 第二节 差异表达蛋白的验证 | 第40-48页 |
| ·差异表达蛋白质相互作用网络图 | 第40-41页 |
| ·Western-blot验证结果 | 第41-43页 |
| ·Real time RT-PCR结果 | 第43-45页 |
| ·免疫荧光检测蛋白表达和定位 | 第45-47页 |
| ·细胞培养上清中IL-1α的浓度检测 | 第47-48页 |
| 第三节 HSP27与CFL-1相互作用机制的研究 | 第48-51页 |
| ·急性刺激下HSP27和CFL-1的表达 | 第48-49页 |
| ·HSP27 siRNA的转染效率 | 第49-50页 |
| ·干扰HSP27、及急性刺激后,CFL-1的表达 | 第50-51页 |
| 第五章 讨论 | 第51-55页 |
| 1. HSP27的生物学功能 | 第51-52页 |
| 2. CFL-1的生物学功能 | 第52-53页 |
| 3. SOD-1的生物学功能 | 第53页 |
| 4. HSP27,SOD1和CFL1的相关性 | 第53-55页 |
| 结论 | 第55-56页 |
| 展望 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 缩略词表 | 第63-65页 |
| 攻读硕士期间发表论文 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
