| 摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 缩略词表 | 第15-18页 |
| 第一章 前言 | 第18-32页 |
| 1 课题提出 | 第18-19页 |
| 2 前人研究进展 | 第19-30页 |
| 2.1 质体研究概况 | 第19-20页 |
| 2.2 有色体的研究进展 | 第20-23页 |
| 2.2.1 有色体结构具有多样性 | 第20-21页 |
| 2.2.2 有色体分化 | 第21页 |
| 2.2.3 有色体的提纯分离 | 第21-23页 |
| 2.3 质体小球研究概况 | 第23-25页 |
| 2.3.1 质体小球的特征及组成 | 第23-24页 |
| 2.3.2 质体小球的功能 | 第24-25页 |
| 2.4 质体小球定位ABC1激酶的研究概况 | 第25-26页 |
| 2.5 蛋白质组学在质体研究上的进展 | 第26-28页 |
| 2.6 磷酸化蛋白质组研究进展 | 第28-29页 |
| 2.7 柑橘质体研究进展 | 第29-30页 |
| 3 本研究的目的与内容 | 第30-32页 |
| 第二章 柑橘果肉有色体的结构和分化及其分子调控机理探索 | 第32-47页 |
| 1 引言 | 第32页 |
| 2 材料与方法 | 第32-34页 |
| 2.1 材料 | 第32-33页 |
| 2.2 方法 | 第33-34页 |
| 2.2.1 细胞学观察及分析 | 第33页 |
| 2.2.2 类胡萝卜素含量分析 | 第33页 |
| 2.2.3 RNA提取与实时定量PCR分析 | 第33-34页 |
| 2.2.4 蛋白质提取及Western杂交分析 | 第34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-42页 |
| 3.1 柑橘果肉有色体结构的多样性 | 第34-38页 |
| 3.2 晶状和球状有色体分化过程中的结构变化 | 第38-40页 |
| 3.3 晶状和球状有色体与类胡萝卜素含量及组分的关联分析 | 第40-41页 |
| 3.4 晶状和球状有色体与类胡萝卜素代谢相关基因表达水平的关联分析 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-46页 |
| 4.1 晶状有色体与球状有色体的特征及形成原因分析 | 第42-43页 |
| 4.2 柑橘果肉独特的有色体分化模式 | 第43-45页 |
| 4.3 球状和晶状有色体的形成机理的复杂性 | 第45-46页 |
| 5 本章小结 | 第46-47页 |
| 第三章 柑橘果肉有色体提纯及蛋白质谱 | 第47-62页 |
| 1 引言 | 第47-48页 |
| 2 材料与方法 | 第48-52页 |
| 2.1 材料 | 第48页 |
| 2.2 方法 | 第48-52页 |
| 2.2.1 柑橘果肉有色体提纯方法的建立 | 第48-49页 |
| 2.2.2 有色体蛋白质提取 | 第49-50页 |
| 2.2.3 Western杂交分析检测提纯有色体的纯度 | 第50页 |
| 2.2.4 蛋白质溶解 | 第50页 |
| 2.2.5 蛋白质鉴定 | 第50-51页 |
| 2.2.6 生物信息学分析 | 第51页 |
| 2.2.7 有色体结构分析 | 第51-52页 |
| 3 结果与分析 | 第52-55页 |
| 3.1 密度梯度离心提纯柑橘有色体 | 第52页 |
| 3.2 提纯有色体的完整度及纯度分析 | 第52-54页 |
| 3.3 柑橘有色体蛋白鉴定和功能归类 | 第54-55页 |
| 3.4 柑橘有色体蛋白质的保守性和特殊性 | 第55页 |
| 4 讨论 | 第55-60页 |
| 4.1 柑橘有色体提纯方法的改进和不足之处 | 第55-56页 |
| 4.2 柑橘有色体具有完整的类胡萝卜素代谢途径 | 第56-59页 |
| 4.3 柑橘有色体中具有广泛而活跃的蛋白转运及加工调控途径 | 第59页 |
| 4.4 柑橘有色体蛋白谱与番茄有色体蛋白谱的比较 | 第59-60页 |
| 5 本章小结 | 第60-62页 |
| 第四章 有色体磷酸化蛋白组及FBN磷酸化蛋白的鉴定 | 第62-78页 |
| 1 引言 | 第62页 |
| 2 材料与方法 | 第62-65页 |
| 2.1 材料 | 第62页 |
| 2.2 方法 | 第62-65页 |
| 2.2.1 有色体提纯及其蛋白提取 | 第62-63页 |
| 2.2.2 蛋白溶液内酶解 | 第63页 |
| 2.2.3 TiO_2富集磷酸化肽段 | 第63页 |
| 2.2.4 质谱分析 | 第63-64页 |
| 2.2.5 数据分析 | 第64页 |
| 2.2.6 生物信息学分析 | 第64-65页 |
| 3 结果与分析 | 第65-71页 |
| 3.1 柑橘果实发育过程中果肉有色体的磷酸化蛋白质谱 | 第65-67页 |
| 3.2 质体磷酸化蛋白的功能分类 | 第67-68页 |
| 3.3 柑橘有色体磷酸化蛋白的模型 | 第68-71页 |
| 4 讨论 | 第71-77页 |
| 4.1 柑橘有色体磷酸化蛋白质谱的主要特点 | 第71-72页 |
| 4.2 能量稳定相关的磷酸化蛋白具有高度保守性 | 第72-73页 |
| 4.3 CitTOC159的磷酸化修饰特点 | 第73-75页 |
| 4.4 柑橘谷胱甘肽循环的磷酸化修饰 | 第75页 |
| 4.5 柑橘有色体磷酸化蛋白组与拟南芥叶绿体磷酸化蛋白组比较 | 第75-77页 |
| 5 本章小结 | 第77-78页 |
| 第五章 比较蛋白质组学揭示柑橘果肉中淀粉体向有色体分化过程的蛋白动态变化 | 第78-104页 |
| 1 引言 | 第78-79页 |
| 2 材料与方法 | 第79-85页 |
| 2.1 材料 | 第79页 |
| 2.2 方法 | 第79-85页 |
| 2.2.1 蛋白溶液内酶解 | 第79页 |
| 2.2.2 酶解和肽段定量 | 第79-80页 |
| 2.2.3 肽段标记 | 第80页 |
| 2.2.4 阳离子交换(SCX)分级 | 第80页 |
| 2.2.5 毛细管高效液相色谱 | 第80-81页 |
| 2.2.6 质谱鉴定 | 第81页 |
| 2.2.7 数据分析 | 第81-82页 |
| 2.2.8 定量分析 | 第82页 |
| 2.2.9 生物信息学分析 | 第82页 |
| 2.2.10 光镜和电镜观察 | 第82页 |
| 2.2.11 SDS-PAGE和Western杂交分析 | 第82-83页 |
| 2.2.12 CitABC1K1、3和9亚细胞定位 | 第83-84页 |
| 2.2.13 沉默筛选体系的建立 | 第84页 |
| 2.2.14 ABC1K1、3和9的遗传转化 | 第84-85页 |
| 3 结果与分析 | 第85-97页 |
| 3.1 柑橘果肉有色体分化过程中质体结构的变化 | 第85页 |
| 3.2 iTRAQ比较蛋白组分析 | 第85-88页 |
| 3.3 柑橘有色体分化过程中的质体蛋白质谱 | 第88-89页 |
| 3.4 有色体分化过程中的质体蛋白动态变化 | 第89-91页 |
| 3.5 有色体分化过程的宏观变化 | 第91-92页 |
| 3.6 柑橘质体编码蛋白的丰度变化 | 第92-93页 |
| 3.7 质体小球定位蛋白变化 | 第93-94页 |
| 3.8 柑橘有色体的发育相关因子变化 | 第94-96页 |
| 3.9 柑橘有色体的衰老相关因子变化 | 第96页 |
| 3.10 ABC1K9沉默载体筛选 | 第96-97页 |
| 4 讨论 | 第97-103页 |
| 4.1 柑橘有色体蛋白谱的广泛性 | 第97-98页 |
| 4.2 柑橘质体小球的形成 | 第98-99页 |
| 4.3 类胡萝卜素的代谢 | 第99-100页 |
| 4.4 质体翻译机制丢失和蛋白降解及加工机制的活跃 | 第100-101页 |
| 4.5 有色体衰老调控 | 第101-102页 |
| 4.6 ABClK1、3和9功能探讨 | 第102-103页 |
| 5 本章小结 | 第103-104页 |
| 第六章 未来研究展望 | 第104-106页 |
| 参考文献 | 第106-125页 |
| 附录Ⅰ PCR引物及基因克隆 | 第125-129页 |
| 附录Ⅱ 418个红暗柳橙有色体的蛋白质谱 | 第129-143页 |
| 附录Ⅲ 高可信度的有色体磷酸化蛋白 | 第143-148页 |
| 附录Ⅳ 有色体分化过程和衰老过程的差异蛋白 | 第148-156页 |
| 附录Ⅴ 柑橘质体编码蛋白 | 第156-157页 |
| 附录Ⅵ 柑橘有色体质体小球蛋白 | 第157-158页 |
| 附录Ⅶ 攻读博士期间发表论文 | 第158-159页 |
| 致谢 | 第159-160页 |
