| 摘要 | 第9-10页 |
| 英文摘要 | 第10页 |
| 1 前言 | 第11-20页 |
| 1.1 金黄色葡萄球菌蛋白A | 第11-13页 |
| 1.1.1 SPA的简介 | 第11页 |
| 1.1.2 SPA的理化性质 | 第11-12页 |
| 1.1.3 SPA的结构特性 | 第12页 |
| 1.1.4 SPA的生物学特性 | 第12页 |
| 1.1.5 SPA的免疫学应用 | 第12-13页 |
| 1.2 链球菌蛋白G | 第13-15页 |
| 1.2.1 SPG简介 | 第13页 |
| 1.2.2 SPG的理化性质和结构特性 | 第13-14页 |
| 1.2.3 SPG的生物学特性 | 第14页 |
| 1.2.4 SPG的应用 | 第14-15页 |
| 1.3 大消化链球菌表面蛋白L | 第15-17页 |
| 1.3.1 PPL简介 | 第15页 |
| 1.3.2 PPL的理化性质和结构特性 | 第15-16页 |
| 1.3.3 PPL的生物学活性 | 第16页 |
| 1.3.4 PPL的应用 | 第16-17页 |
| 1.4 多物种共患传染病及检测方法 | 第17-19页 |
| 1.4.1 多物种共患传染病简介 | 第17页 |
| 1.4.2.蹄疫 | 第17-18页 |
| 1.4.3 布鲁氏杆菌病 | 第18-19页 |
| 1.5 研究目的与意义 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-31页 |
| 2.1 材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 重组质粒、菌株 | 第20页 |
| 2.1.2 生物学试剂、血清和抗体 | 第20-21页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第21-22页 |
| 2.2 方法 | 第22-31页 |
| 2.2.1 重组蛋白[AGL]n基因的设计、串联、表达 | 第22-23页 |
| 2.2.2 串联AGL基因载体p ET-30a(+)-[AGL]n的构建 | 第23-24页 |
| 2.2.3 [AGL]n蛋白的原核表达 | 第24-25页 |
| 2.2.4 重组蛋白[AGL]n免疫球蛋白结合活性的鉴定 | 第25-26页 |
| 2.2.5 标记蛋白与多种动物Ig结合活性分析 | 第26页 |
| 2.2.6 [AGL]2-HRP应用于检测Bo IFN-α多克隆抗体 | 第26-27页 |
| 2.2.7 [AGL]2-HRP应用于布鲁氏菌病和BVDV临床样品检测 | 第27页 |
| 2.2.8 [AGL]2-HRP用于 8BF-ELISA | 第27-31页 |
| 3 结果 | 第31-50页 |
| 3.1 重组克隆载体PET-30a(+)-AGL的构建 | 第31-34页 |
| 3.1.1 B-PPL多肽的基因优化 | 第31-33页 |
| 3.1.2 重组质粒p JWF-PPL的鉴定 | 第33页 |
| 3.1.3 重组克隆载体p ET-30a(+)-AGL构建 | 第33-34页 |
| 3.2 [AGL]n蛋白的表达和鉴定 | 第34-37页 |
| 3.2.1 串联AGL基因表达载体p ET-30a(+)-[AGL]n的构建 | 第34页 |
| 3.2.2 重组蛋白[AGL]n的诱导表达与纯化 | 第34-35页 |
| 3.2.3 重组蛋白[AGL]n的Western bolt鉴定结果 | 第35-37页 |
| 3.3 酶标蛋白的制备与鉴定 | 第37-38页 |
| 3.3.1 重组[AGL]2 蛋白标记 | 第37页 |
| 3.3.2 酶标蛋白活性检测 | 第37-38页 |
| 3.4 酶标蛋白活性分析 | 第38-40页 |
| 3.5 酶标[AGL]2 蛋白应用于检测Bo IFN-α多克隆抗体 | 第40页 |
| 3.6 酶标蛋白用于布鲁氏杆菌病和BVDV临床样品检测 | 第40-42页 |
| 3.7 酶标蛋白用于 8BF-ELISA检测FMD方法的建立 | 第42-48页 |
| 3.7.1 AGL-ELISA相关条件确定 | 第42-45页 |
| 3.7.2 AGL-ELISA重复性试验 | 第45页 |
| 3.7.3 AGL-ELISA特异性试验 | 第45-46页 |
| 3.7.4 AGL-ELISA保存期试验 | 第46页 |
| 3.7.5 AGL-ELISA与 3ABC-I-ELISA试剂盒比较 | 第46页 |
| 3.7.6 AGL-ELISA检测猪血清、羊、鹿血清反应条件的确立 | 第46-47页 |
| 3.7.7 AGL-ELISA检测多种动物FMD临界值的确定 | 第47-48页 |
| 3.8 AGL-ELISA在临床检测中的应用 | 第48-50页 |
| 4 讨论 | 第50-54页 |
| 4.1 选取SPA、SPG、PPL单结构域的依据 | 第50-51页 |
| 4.2 串联基因AGL的构建策略和生物信息学特征 | 第51-52页 |
| 4.3 AGL-ELISA方法中动物血清相关条件的选择 | 第52-53页 |
| 4.4 AGL-ELISA在多物种共患病检测中的应用 | 第53-54页 |
| 5 结论 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第61页 |
