| 摘要 | 第8-9页 |
| 英文摘要 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第11-22页 |
| 1.1 肿瘤 | 第11-15页 |
| 1.1.1 犬乳腺肿瘤的研究概述 | 第11-13页 |
| 1.1.2 细胞周期调控与肿瘤 | 第13-15页 |
| 1.2 细胞周期相关因子cyclinD_1与P27~(kip) | 第15-17页 |
| 1.2.1 cyclinD_1 | 第15-16页 |
| 1.2.2 P27~(kip) | 第16-17页 |
| 1.3 免疫病理 | 第17-21页 |
| 1.4 本实验研究目的及意义 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-26页 |
| 2.1.1 细胞系及实验动物 | 第22页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.3 主要化学试剂和生物耗材 | 第23-24页 |
| 2.1.4 主要试剂的配制 | 第24-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-38页 |
| 2.2.1 实验前的准备工作 | 第26-27页 |
| 2.2.2 犬乳腺肿瘤细胞的体外培养 | 第27-28页 |
| 2.2.3 犬cyclinD_1的原核表达 | 第28-34页 |
| 2.2.4 多克隆抗体的制备 | 第34-36页 |
| 2.2.5 CHMp、CHMm及犬正常乳腺中cyclinD_1、P27~(kip) mRNA及蛋白含量的测定 | 第36-37页 |
| 2.2.6 犬乳腺肿瘤分类及cyclinD_1、P27~(kip)表达情况 | 第37-38页 |
| 2.3 实验结果判定 | 第38页 |
| 2.4 实验数据的分析与统计 | 第38-39页 |
| 3 实验结果 | 第39-57页 |
| 3.1 犬cyclinD_1的原核表达及抗体制备 | 第39-47页 |
| 3.1.1 RNA提取、反转录结果 | 第39-40页 |
| 3.1.2 目的片段胶回收结果 | 第40页 |
| 3.1.3 p MD18-T载体与目的基因连接转化结果 | 第40-41页 |
| 3.1.4 重组质粒p MD18-T-cyclinD_1测序结果 | 第41-42页 |
| 3.1.5 重组质粒提取结果 | 第42页 |
| 3.1.6 目的片段双酶切结果 | 第42-43页 |
| 3.1.7 目的片段双酶切后胶回收结果 | 第43页 |
| 3.1.8 表达载体（p ET32a）与目的基因连接转化结果 | 第43-44页 |
| 3.1.9 重组质粒（p ET32a-cyclinD_1）双酶切鉴定 | 第44页 |
| 3.1.10 重组质粒（p ET32a-cyclinD_1）测序结果 | 第44-45页 |
| 3.1.11 重组质粒（p ET32a-cyclinD_1）转染BL21 PCR鉴定 | 第45页 |
| 3.1.12 IPTG诱导重组质粒（p ET32a-cyclinD_1）表达 | 第45-46页 |
| 3.1.13 大量诱导后胶回收目的蛋白 | 第46页 |
| 3.1.14 Western Blott鉴定目的蛋白 | 第46页 |
| 3.1.15 ELISA检测抗体效价 | 第46-47页 |
| 3.1.16 Western Blot检测多抗血清 | 第47页 |
| 3.2 CHMp、CHMm及正常犬乳腺中cyclinD_1、P27~(kip) mRNA及蛋白含量的测定 | 第47-49页 |
| 3.2.1 CHMp、CHMm及犬正常乳腺中cyclinD_1、P27~(kip) mRNA含量的测定 | 第47-48页 |
| 3.2.2 CHMp、CHMm及犬正常乳腺中cyclinD_1、P27~(kip)蛋白含量的测定 | 第48-49页 |
| 3.3 犬乳腺肿瘤的分类及cyclinD_1、P27~(kip)表达情况 | 第49-57页 |
| 3.3.1 犬乳腺肿瘤的分类 | 第49-51页 |
| 3.3.2 Cyclin D1与P27~(kip)在犬乳腺肿瘤中的表达情况 | 第51-57页 |
| 4 讨论 | 第57-61页 |
| 4.1 犬cyclinD_1多克隆抗体的制备 | 第57-58页 |
| 4.2 犬乳腺肿瘤细胞系CHMp、CHMm中cyclinD_1与P27~(kip)含量的检测 | 第58-59页 |
| 4.3 犬乳腺肿瘤的分类与cyclinD_1及P27~(kip)蛋白表达情况 | 第59-61页 |
| 5 结论 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 附录A 英文缩略表 | 第68-69页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第69页 |
