| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 中英文缩略词表 | 第14-15页 |
| 1 引言 | 第15-18页 |
| 2 实验材料与方法 | 第18-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-22页 |
| 2.1.1 实验细胞 | 第18页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第18页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第18-20页 |
| 2.1.4 主要试剂的配制 | 第20-22页 |
| 2.1.4.1 SiO_2粉尘悬液的配制（100mg/mL储备液） | 第20页 |
| 2.1.4.2 肺泡灌洗液I | 第20页 |
| 2.1.4.3 肺泡灌洗液II | 第20页 |
| 2.1.4.4 大鼠IgG包被液 | 第20页 |
| 2.1.4.5 DNAse I分散液 | 第20-21页 |
| 2.1.4.6 10ⅹ蛋白电泳缓冲液 | 第21页 |
| 2.1.4.7 4ⅹ蛋白Loading buffer | 第21页 |
| 2.1.4.8 10ⅹ蛋白电泳转膜缓冲液 | 第21页 |
| 2.1.4.9 25ⅹTBS | 第21页 |
| 2.1.4.10 50ⅹTAE电泳缓冲液 | 第21页 |
| 2.1.4.11 0.1%DEPC水的处理 | 第21-22页 |
| 2.2 主要实验器材 | 第22-23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-36页 |
| 2.3.1 大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的提取培养与鉴定 | 第23-25页 |
| 2.3.1.1 大鼠原代肺泡Ⅱ型上皮细胞（AECⅡ）的提取培养 | 第23-24页 |
| 2.3.1.2 细胞株大鼠原代肺泡Ⅱ型上皮细胞（RLE-6TN）的复苏与培养 | 第24页 |
| 2.3.1.3 RLE-6TN的冻存 | 第24-25页 |
| 2.3.2 肺泡Ⅱ型上皮细胞的透射电镜处理 | 第25页 |
| 2.3.3 大鼠肺泡巨噬细胞的提取与培养 | 第25-26页 |
| 2.3.4 CCK-8 法检测SiO_2对AM、AECⅡ和RLE-6TN细胞增殖抑制能力的影响 | 第26页 |
| 2.3.5 Transwell共培养模型的建立与分组 | 第26-27页 |
| 2.3.5.1 AECⅡ与AM的共培养模型的建立与分组 | 第26-27页 |
| 2.3.5.2 RLE-6TN与AM共培养模型的建立与分组 | 第27页 |
| 2.3.6 酶联免疫吸附试验（ELISA） | 第27-28页 |
| 2.3.7 qRT-PCR法检测RLE-6TN中基因的表达 | 第28-32页 |
| 2.3.7.1 设计相关的引物 | 第28-29页 |
| 2.3.7.2 RLE-6TN总RNA的提取 | 第29页 |
| 2.3.7.3 RNA的测定 | 第29页 |
| 2.3.7.4 RNA反转录为cDNA | 第29-30页 |
| 2.3.7.5 cDNA梯度扩增 | 第30-31页 |
| 2.3.7.6 qRT-PCR法检测RLE-6TN中E-cad、α-SMA和GAPDH mRNA的表达 | 第31-32页 |
| 2.3.8 Western boltting法检测AECⅡ和RLE-6TN中蛋白的表达 | 第32-34页 |
| 2.3.8.1 细胞蛋白的提取 | 第32页 |
| 2.3.8.2 肺组织蛋白的提取 | 第32-33页 |
| 2.3.8.3 BCA法测定蛋白浓度 | 第33页 |
| 2.3.8.4 蛋白样品的处理 | 第33页 |
| 2.3.8.5 聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）电泳 | 第33-34页 |
| 2.3.9 动物模型的建立 | 第34页 |
| 2.3.10 肺组织冰冻切片处理 | 第34-35页 |
| 2.3.11 肺组织冰冻切片免疫荧光染色 | 第35页 |
| 2.3.12 统计分析 | 第35-36页 |
| 3 结果 | 第36-51页 |
| 3.1 游离SiO_2诱导AECⅡ发生EMT过程 | 第36-40页 |
| 3.1.1 光学倒置显微镜下观察不同培养时段的AECⅡ的形态变化 | 第36页 |
| 3.1.2 透射电镜的鉴定 | 第36-37页 |
| 3.1.3 游离SiO_2粉尘的扫描电镜形态学观察 | 第37-38页 |
| 3.1.4 CCK-8 检测SiO_2对AM和AECⅡ细胞活性的影响 | 第38-39页 |
| 3.1.5 SiO_2染尘暴露不同时间后，AECⅡ上清液中TGF-β1 的含量 | 第39页 |
| 3.1.6 不同染尘时间、不同组别的AECⅡ转分化E-cad和 α-SMA蛋白表达 | 第39-40页 |
| 3.2 | 第40-46页 |
| 3.2.1 透射电镜的鉴定 | 第40-41页 |
| 3.2.2 CCK-8 检测SiO_2对AM和RLE-6TN细胞活性的影响 | 第41页 |
| 3.2.3 SiO_2染尘暴露不同时间后，RLE-6TN的上清液中TGF-β1 的含量 | 第41-42页 |
| 3.2.4 不同染尘时间、不同组别的RLE-6TN转分化E-cad和 α-SMA蛋白表达的影响 | 第42-44页 |
| 3.2.5 不同染尘时间、不同组别的RLE-6TN转分化E-cad和 α-SMA mRNA表达的影响 | 第44-46页 |
| 3.2.5.1 细胞总RNA质量检测 | 第44-45页 |
| 3.2.5.2 合成引物的验证 | 第45页 |
| 3.2.5.3 qRT-PCR检测E-cad和α-SMA mRNA的相对表达水平 | 第45-46页 |
| 3.3 游离SiO_2诱导大鼠矽肺模型中肺泡Ⅱ型上皮细胞发生EMT的动态变化 | 第46-51页 |
| 3.3.1 矽肺大鼠肺组织形态观察 | 第46-48页 |
| 3.3.2 ELISA测定矽肺模型不同时间点肺组织研磨液中的TGF-β1 的含量 | 第48页 |
| 3.3.3 矽肺大鼠肺组织冰冻切片免疫荧光双重染色 | 第48-51页 |
| 4 讨论 | 第51-56页 |
| 4.1 原代肺泡Ⅱ型上皮细胞体外实验模型的EMT鉴定 | 第51-53页 |
| 4.2 肺泡Ⅱ型上皮细胞（RLE-6TN）体外实验模型的EMT鉴定 | 第53-55页 |
| 4.3 肺泡Ⅱ型上皮细胞体内实验模型的EMT鉴定 | 第55-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-61页 |
| 综述 肺泡II型上皮细胞与上皮间质转分化的研究进展 | 第61-76页 |
| 1. AECⅡ的增殖修复 | 第61-63页 |
| 2. AECⅡ的免疫功能 | 第63-64页 |
| 3.EMT与AECⅡ的增殖修复 | 第64-66页 |
| 4.EMT与肺纤维化 | 第66-69页 |
| 参考文献 | 第69-76页 |
| 个人简历 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
