| 摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 前言 | 第12-18页 |
| 第一部分 穿梭质粒载体的构建 | 第18-33页 |
| 引言 | 第18页 |
| 1.1 实验材料 | 第18-20页 |
| 1.1.1 实验样本 | 第18页 |
| 1.1.2 实验试剂 | 第18-19页 |
| 1.1.3 实验仪器 | 第19-20页 |
| 1.2 实验方法 | 第20-26页 |
| 1.2.1 rβ 与IRES-rα 的引物设计 | 第20页 |
| 1.2.2 重组质粒载体pDC315-rβ-IRES-rα 的构建过程 | 第20-21页 |
| 1.2.3 rβ 及IRES-rα 的扩增 | 第21-22页 |
| 1.2.4 PCR产物的纯化 | 第22页 |
| 1.2.5 双酶切pDC315空载体与PCR纯化产物rβ | 第22-23页 |
| 1.2.6 双酶切产物胶回收 | 第23页 |
| 1.2.7 pDC315双酶切片段和rβ 双酶切片段进行连接 | 第23-24页 |
| 1.2.8 连接产物转化和鉴定 | 第24-25页 |
| 1.2.9 去内毒素质粒pDC315-rβ 的提取 | 第25-26页 |
| 1.2.10 IRES-rα 与pDC315-rβ 的双酶切 | 第26页 |
| 1.3 结果 | 第26-29页 |
| 1.3.1 rβ 及rα 的扩增 | 第26-27页 |
| 1.3.2 pDC315-rβ-IRES-rα 构建结果 | 第27-29页 |
| 1.4 讨论 | 第29-32页 |
| 1.5 结论 | 第32-33页 |
| 第二部分 重组嵌合型腺病毒Ad5/F35的包装、鉴定与滴度测定 | 第33-43页 |
| 引言 | 第33页 |
| 2.1 材料 | 第33-34页 |
| 2.1.1 质粒、细胞和试剂 | 第33页 |
| 2.1.2 仪器 | 第33-34页 |
| 2.2 方法 | 第34-38页 |
| 2.2.1 HEK-293细胞的培养 | 第34页 |
| 2.2.2 Ad5/F35-rβ-IRES-rα 重组腺病毒的包装 | 第34-35页 |
| 2.2.3 重组腺病毒鉴定 | 第35-36页 |
| 2.2.4 扩大培养重组腺病毒 | 第36-37页 |
| 2.2.5 重组腺病毒Ad5/F35-rβ-IRES-rα 的滴度测定 | 第37页 |
| 2.2.6 流式细胞仪检测重组腺病毒载体在PBMC细胞的表达 | 第37-38页 |
| 2.3 结果 | 第38-40页 |
| 2.3.1 HEK-293细胞包装重组腺病毒 | 第38页 |
| 2.3.2 重组嵌合型腺病毒Ad5/F35-rβ-IRES-rα 的鉴定 | 第38-40页 |
| 2.4 讨论 | 第40-42页 |
| 2.5 结论 | 第42-43页 |
| 第三部分 嵌合型TCR分子活化T细胞能力的检测 | 第43-60页 |
| 引言 | 第43页 |
| 3.1 材料 | 第43-44页 |
| 3.1.1 试剂 | 第43-44页 |
| 3.2 实验方法 | 第44-49页 |
| 3.2.1 细胞分组与实验处理 | 第44页 |
| 3.2.2 Western blot检测细胞信号分子PKC、p-Erk、NFAT的磷酸化变化情况 | 第44-47页 |
| 3.2.3 荧光定量PCR分析细胞因子在mRNA水平的变化 | 第47-48页 |
| 3.2.4 酶联免疫吸附测定IFN-γ、IL-2 的分泌变化 | 第48-49页 |
| 3.2.5 统计学分析 | 第49页 |
| 3.3 结果 | 第49-54页 |
| 3.3.1 Western Blot检测细胞内信号分子磷酸化变化结果 | 第49-52页 |
| 3.3.2 IL-2、IFN-γ 在mRNA水平的表达变化 | 第52-53页 |
| 3.3.3 IL-2、IFN-γ 在分泌水平的表达变化 | 第53-54页 |
| 3.4 讨论 | 第54-59页 |
| 3.5 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 附录一 英文缩略词表 | 第66-67页 |
| 附录二 质粒图谱 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
