| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 符号表 | 第8-12页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-19页 |
| 1.1 口蹄疫 | 第12-13页 |
| 1.1.1 口蹄疫国内外流行现状 | 第12页 |
| 1.1.2 病毒的特征 | 第12-13页 |
| 1.2 口蹄疫诊断方法 | 第13-17页 |
| 1.2.1 临床诊断 | 第13页 |
| 1.2.2 病原学诊断 | 第13-15页 |
| 1.2.3 血清学检测方法 | 第15-17页 |
| 1.3 单克隆抗体在口蹄疫诊断中的应用 | 第17-18页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 第2章 O型口蹄病毒VP1基因的克隆与原核表达 | 第19-34页 |
| 2.1 材料 | 第19-21页 |
| 2.1.1 血清样品及疫苗 | 第19页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第19页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第19-20页 |
| 2.1.4 常用溶液及其配制 | 第20-21页 |
| 2.2 方法 | 第21-28页 |
| 2.2.1 引物的设计与合成 | 第21-22页 |
| 2.2.2 PCR扩增 | 第22-23页 |
| 2.2.3 克隆载体pGEM-T-VP1的构建 | 第23-24页 |
| 2.2.4 重组表达载体pQE30VP1的构建 | 第24-25页 |
| 2.2.5 重组蛋白的诱导表达 | 第25-26页 |
| 2.2.6 重组蛋白纯化 | 第26-27页 |
| 2.2.7 重组蛋白的活性鉴定 | 第27-28页 |
| 2.3 结果与分析 | 第28-31页 |
| 2.3.1 O型FMDV VP1基因的PCR扩增结果 | 第28页 |
| 2.3.2 克隆载体pGEM-T-VP1的鉴定结果 | 第28-29页 |
| 2.3.3 重组表达载体pQE30VP1的鉴定结果 | 第29页 |
| 2.3.4 重组菌诱导表达结果 | 第29-30页 |
| 2.3.5 重组蛋白活性鉴定结果 | 第30-31页 |
| 2.4 讨论 | 第31-34页 |
| 第3章 间接ELISA检测抗O型口蹄疫病毒VP1蛋白抗体方法的建立 | 第34-42页 |
| 3.1 材料 | 第34-35页 |
| 3.1.1 主要试剂 | 第34页 |
| 3.1.2 抗原、抗体及待检样品 | 第34页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第34-35页 |
| 3.1.4 常用ELISA试剂溶液及其配制 | 第35页 |
| 3.2 方法 | 第35-37页 |
| 3.2.1 检测VP1抗体的间接ELISA方法建立 | 第35-37页 |
| 3.2.2 间接ELISA检测方法的特异性实验 | 第37页 |
| 3.3 结果与分析 | 第37-39页 |
| 3.3.1 间接ELISA方法的建立 | 第37-39页 |
| 3.3.2 特异性实验 | 第39页 |
| 3.4 讨论 | 第39-42页 |
| 第4章 抗O型口蹄病毒VP1蛋白单克隆抗体制备 | 第42-61页 |
| 4.1 材料 | 第42-45页 |
| 4.1.1 主要试剂 | 第42页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第42-43页 |
| 4.1.3 细胞、实验动物、疫苗及血清 | 第43页 |
| 4.1.4 常用溶液及其配制 | 第43-45页 |
| 4.2 方法 | 第45-51页 |
| 4.2.1 小鼠免疫 | 第45页 |
| 4.2.2 免疫小鼠血清效价的检测 | 第45页 |
| 4.2.3 杂交瘤细胞株的建立 | 第45-47页 |
| 4.2.4 腹水单抗的制备 | 第47-48页 |
| 4.2.5 单抗的效价测定 | 第48页 |
| 4.2.6 单抗亚类的鉴定 | 第48页 |
| 4.2.7 单抗的纯化及浓度测定 | 第48页 |
| 4.2.8 纯化单抗的SDS-PAGE鉴定 | 第48-49页 |
| 4.2.9 单抗的生物学鉴定 | 第49-51页 |
| 4.3 结果与分析 | 第51-59页 |
| 4.3.1 免疫小鼠血清效价的检测结果 | 第51-52页 |
| 4.3.2 杂交瘤细胞株的建立 | 第52-53页 |
| 4.3.3 单抗效价测定 | 第53页 |
| 4.3.4 单抗亚型鉴定 | 第53-54页 |
| 4.3.5 单抗纯化结果 | 第54页 |
| 4.3.6 单抗的生物学鉴定 | 第54-59页 |
| 4.4 讨论 | 第59-61页 |
| 第5章 结论 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 致谢 | 第69-71页 |
| 硕士期间的研究成果 | 第71页 |
