| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第9-18页 |
| 1.1 羰基还原酶不对称转化制备手性化合物 | 第9-10页 |
| 1.1.1 羰基还原酶概述 | 第9页 |
| 1.1.2 羰基还原酶不对称制备手性化合物 | 第9页 |
| 1.1.3 羰基还原酶工业化应用的限制因素 | 第9-10页 |
| 1.2 葡萄糖脱氢酶用于不对称还原反应中的辅酶再生 | 第10-12页 |
| 1.2.1 辅酶再生方法 | 第10-11页 |
| 1.2.2 葡萄糖脱氢酶用于不对称还原反应中的辅酶再生 | 第11-12页 |
| 1.3 酿酒酵母孢子作为羰基还原酶的固定化载体 | 第12-15页 |
| 1.3.1 酶固定化的优势 | 第12页 |
| 1.3.2 酿酒酵母孢子作为新型酶固定化载体的优势 | 第12-14页 |
| 1.3.3 葡萄糖脱氢酶用于酿酒酵母微胶囊酶多批次生产手性醇的限制因素 | 第14-15页 |
| 1.4 基因工程手段改良葡萄糖脱氢酶的底物特异性 | 第15-16页 |
| 1.5 课题的研究意义和内容 | 第16-18页 |
| 第二章 材料与方法 | 第18-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-21页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第18-19页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第19页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第19-20页 |
| 2.1.4 实验所需培养基与相关溶液 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-28页 |
| 2.2.1 葡萄糖脱氢酶点突变重组菌株的构建 | 第21-23页 |
| 2.2.2 定点突变葡萄糖脱氢酶催化底物木糖的效果及其酶学性质 | 第23-24页 |
| 2.2.3 SCRⅡ-GDH(A258F)微胶囊酶体系的构建 | 第24-26页 |
| 2.2.4 孢子内包埋目标蛋白的免疫蛋白印记分析验证 | 第26页 |
| 2.2.5 微胶囊酶不对称合成苯基乙二醇 | 第26-28页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第28-42页 |
| 3.1 定点突变提高葡萄糖脱氢酶催化木糖的活性 | 第28-32页 |
| 3.1.1 定点突变位点的确定 | 第28-29页 |
| 3.1.2 突变株的构建 | 第29-30页 |
| 3.1.3 定点突变葡萄糖脱氢酶的诱导表达 | 第30页 |
| 3.1.4 定点突变葡萄糖脱氢酶的纯化 | 第30-32页 |
| 3.2 葡萄糖脱氢酶及其突变酶的酶学性质 | 第32-35页 |
| 3.2.1 GDH及其突变酶的最适反应pH和pH稳定性 | 第32页 |
| 3.2.2 GDH及其突变酶的最适反应温度和热稳定性 | 第32-33页 |
| 3.2.3 GDH及其突变酶对底物葡萄糖与木糖的依赖性 | 第33-34页 |
| 3.2.4 GDH及A258F的有机溶剂耐受性 | 第34-35页 |
| 3.3 SCRⅡ-GDH(A258F)微胶囊体系的构建与表达验证 | 第35-36页 |
| 3.3.1 SCRⅡ-GDH(A258F)微胶囊酶重组质粒的构建 | 第35页 |
| 3.3.2 重组质粒TEF-scrⅡ-gdh/A258F转化酿酒酵母AN120及微胶囊酶的培育 | 第35-36页 |
| 3.3.3 目标蛋白包埋于酿酒酵母孢子中的Western Blotting验证 | 第36页 |
| 3.4 SCRⅡ-GDH(A258F)微胶囊酶不对称转化条件优化及稳定性研究 | 第36-42页 |
| 3.4.1 SCRⅡ-GDH(A258F)微胶囊酶不对称转化反应的时间优化曲线 | 第36-37页 |
| 3.4.2 SCRⅡ-GDH(A258F)微胶囊酶不对称还原反应的最适温度及其热稳定性 | 第37-38页 |
| 3.4.3 SCRⅡ-GDH(A258F)微胶囊酶的最适反应pH和pH稳定性 | 第38-39页 |
| 3.4.4 SCRⅡ-GDH(A258F)微胶囊酶不对称转化反应中 2-羟基苯乙酮与木糖的最适比例 | 第39页 |
| 3.4.5 SCRⅡ-GDH(A258F)微胶囊酶不对称转化反应的多批次使用性能 | 第39-40页 |
| 3.4.6 SCRⅡ-GDH(A258F)微胶囊酶的萌发控制研究 | 第40-42页 |
| 主要结论与展望 | 第42-43页 |
| 主要结论 | 第42页 |
| 展望 | 第42-43页 |
| 致谢 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-50页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第50页 |
