| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 缩略语对照表 | 第8-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-27页 |
| 引言 | 第14页 |
| 1.1 乳腺癌概述 | 第14-17页 |
| 1.1.1 乳腺癌的诊断 | 第14-15页 |
| 1.1.2 乳腺癌的治疗 | 第15页 |
| 1.1.3 乳腺癌的分子诊断及精准治疗 | 第15-17页 |
| 1.1.4 肿瘤基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)计划 | 第17页 |
| 1.2 DNA异常甲基化与乳腺癌 | 第17-21页 |
| 1.2.1 表观遗传学概述 | 第17-18页 |
| 1.2.2 DNA异常甲基化与肿瘤 | 第18页 |
| 1.2.3 DNA异常甲基化与乳腺癌 | 第18-19页 |
| 1.2.4 DNA甲基化的检测方法 | 第19-21页 |
| 1.3 乳腺癌重要的分子标志物ER | 第21-23页 |
| 1.3.1 雌激素受体 | 第21页 |
| 1.3.2 ER介导的信号转导途径 | 第21-22页 |
| 1.3.3 ER与乳腺癌 | 第22-23页 |
| 1.4 乳腺癌多药耐药 | 第23-24页 |
| 1.4.1 肿瘤多药耐药 | 第23-24页 |
| 1.4.2 ER与乳腺癌耐药 | 第24页 |
| 1.4.3 DNA甲基化与乳腺癌耐药 | 第24页 |
| 1.5 本课题的研究目标与意义 | 第24-27页 |
| 第二章 乳腺癌ER表型差异基因的筛选及其甲基化检测方法建立及优化 | 第27-53页 |
| 引言 | 第27-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-30页 |
| 2.1.1 菌株和细胞系 | 第28页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第28-30页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第30页 |
| 2.1.4 实验网络资源及软件 | 第30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-38页 |
| 2.2.1 基于TCGA数据库的乳腺癌ER表型差异基因的筛选 | 第30-31页 |
| 2.2.2 乳腺癌细胞的培养 | 第31页 |
| 2.2.3 5-aza-dc诱导乳腺癌细胞去甲基化 | 第31页 |
| 2.2.4 乳腺癌细胞基因组DNA的提取及转化 | 第31-32页 |
| 2.2.5 乳腺癌细胞基总RNA及蛋白质的提取 | 第32-33页 |
| 2.2.6 焦磷酸测序技术定量检测ER表型差异基因甲基化 | 第33-35页 |
| 2.2.7 qRT-PCR技术检测乳腺癌ER表型差异基因mRNA表达 | 第35-37页 |
| 2.2.8 Western Blot技术检测乳腺癌ER表型差异基因蛋白表达 | 第37-38页 |
| 2.2.9 数据分析 | 第38页 |
| 2.3 实验结果 | 第38-49页 |
| 2.3.1 乳腺癌ER表型差异基因的筛选 | 第38-39页 |
| 2.3.2 乳腺癌ER表型差异基因外围引物PCR扩增 | 第39-41页 |
| 2.3.3 乳腺癌细胞系ER表型差异基因甲基化检测 | 第41-43页 |
| 2.3.4 乳腺癌细胞系ER表型差异基因甲基化焦磷酸测序与Sanger测序 | 第43-45页 |
| 2.3.5 乳腺癌细胞系ER表型差异基因表达水平的qRT-PCR检测 | 第45页 |
| 2.3.6 乳腺癌细胞系ER表型差异基因表达的Western blot检测 | 第45页 |
| 2.3.7 ER表型差异基因甲基化与表达负相关 | 第45-48页 |
| 2.3.8 与ER表型相关的甲基化位点 | 第48-49页 |
| 2.4 讨论 | 第49-52页 |
| 本章小结 | 第52-53页 |
| 第三章 ER表型差异基因甲基化与临床病理参数关联分析 | 第53-72页 |
| 引言 | 第53-54页 |
| 3.1 实验材料 | 第54-55页 |
| 3.1.1 实验试剂 | 第54-55页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第55页 |
| 3.1.3 实验软件 | 第55页 |
| 3.2 实验方法 | 第55-57页 |
| 3.2.1 乳腺癌临床样本收集及信息整理 | 第55-56页 |
| 3.2.2 乳腺癌临床样本基因组DNA提取及转化 | 第56页 |
| 3.2.3 乳腺癌临床样本总RNA提取 | 第56页 |
| 3.2.4 焦磷酸检测乳腺癌临床样本ER表型差异基因的甲基化 | 第56-57页 |
| 3.2.5 qRT-PCR检测乳腺癌临床样本ER表型差异基因的表达 | 第57页 |
| 3.2.6 数据统计分析 | 第57页 |
| 3.3 实验结果 | 第57-68页 |
| 3.3.1 乳腺癌临床样本收集及信息整理 | 第57-59页 |
| 3.3.2 乳腺癌临床样本ER表型差异基因的甲基化与表达负相关 | 第59页 |
| 3.3.3 ESR1、GATA3和GSTP1基因的甲基化与乳腺癌ER表达相关 | 第59-61页 |
| 3.3.4 ESR1、GATA3和GSTP1基因的甲基化与乳腺癌恶性病变相关 | 第61-64页 |
| 3.3.5 GATA3和GSTP1基因的甲基化与乳腺癌肿瘤TNM相关 | 第64-65页 |
| 3.3.6 ER表型差异基因的甲基化水平与乳腺癌分子分型相关 | 第65-67页 |
| 3.3.7 GATA3和GSTP1基因甲基化与乳腺癌St. Gallen复发风险正相关 | 第67-68页 |
| 3.3.8 不同临床病理参数相关的CpG位点筛选 | 第68页 |
| 3.4 讨论 | 第68-71页 |
| 本章小结 | 第71-72页 |
| 第四章 乳腺癌ER表型差异基因甲基化与乳腺癌细胞耐药关联分析 | 第72-105页 |
| 引言 | 第72-74页 |
| 4.1 实验材料 | 第74-76页 |
| 4.1.1 菌株和细胞系 | 第74页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第74-75页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第75-76页 |
| 4.1.4 实验软件 | 第76页 |
| 4.2 实验方法 | 第76-82页 |
| 4.2.1 MTT检测不同乳腺癌细胞系对内分泌药物及化疗药物的耐药指数 | 第76页 |
| 4.2.2 流式细胞术(FCM)分析乳腺癌细胞系细胞周期分布 | 第76-77页 |
| 4.2.3 流式细胞术(FCM)分析乳腺癌细胞系细胞凋亡情况 | 第77页 |
| 4.2.4 常用药物对乳腺癌细胞系ER表型差异基因的甲基化的影响 | 第77页 |
| 4.2.5 5-Aza-dc去甲基化对乳腺癌细胞系药物敏感性的影响 | 第77页 |
| 4.2.6 GATA3、GSTP1基因高甲基化启动子-表达质粒的构建及鉴定 | 第77-80页 |
| 4.2.7 GATA3、GSTP1基因过表达对乳腺癌细胞系药物敏感性的影响 | 第80-81页 |
| 4.2.8 高浓度冲击法筛选乳腺癌细胞紫杉醇耐药株及交叉耐药性测定 | 第81页 |
| 4.2.9 ER表型差异基因甲基化对乳腺癌细胞获得性耐药的调节 | 第81页 |
| 4.2.10 数据分析及处理 | 第81-82页 |
| 4.3 实验结果 | 第82-100页 |
| 4.3.1 不同甲基化特征的乳腺癌细胞系对药物的耐药性差异显著 | 第82页 |
| 4.3.2 EPI和PTX对乳腺癌细胞凋亡及ER表型差异基因甲基化影响 | 第82-85页 |
| 4.3.3 TAM和FUL对乳腺癌细胞凋亡及ER表型差异基因甲基化影响 | 第85-87页 |
| 4.3.4 5-aza-dC去甲基化对乳腺癌细胞系药物敏感性的影响 | 第87-88页 |
| 4.3.5 GATA3基因启动子高甲基化-表达质粒的构建及鉴定 | 第88-91页 |
| 4.3.6 GSTP1基因启动子高甲基化-表达质粒的构建及鉴定 | 第91-93页 |
| 4.3.7 GATA3,GSTP1基因过表达对乳腺癌细胞系药物敏感性的影响 | 第93-96页 |
| 4.3.8 乳腺癌细胞紫杉醇耐药株的筛选及交叉耐药性测定 | 第96-97页 |
| 4.3.9 基因甲基化对乳腺癌细胞获得性耐药的调节 | 第97-99页 |
| 4.3.10 与乳腺癌细胞耐药相关的CpG位点 | 第99-100页 |
| 4.4 讨论 | 第100-103页 |
| 本章小结 | 第103-105页 |
| 全文总结 | 第105-106页 |
| 参考文献 | 第106-114页 |
| 攻读博士学位期间取得的科研成果 | 第114-115页 |
| 致谢 | 第115页 |
