| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 1 绪论 | 第18-28页 |
| 1.1 木聚糖酶 | 第18-21页 |
| 1.1.1 概述 | 第18页 |
| 1.1.2 分类 | 第18-19页 |
| 1.1.3 分子结构 | 第19-20页 |
| 1.1.4 催化机制 | 第20页 |
| 1.1.5 天然木聚糖酶的生产 | 第20-21页 |
| 1.2 木聚糖酶基因的克隆与表达 | 第21-23页 |
| 1.2.1 大肠杆菌表达系统 | 第21-22页 |
| 1.2.2 毕赤酵母表达系统 | 第22-23页 |
| 1.3 木聚糖酶的分子改良 | 第23-25页 |
| 1.3.1 理性设计 | 第23-24页 |
| 1.3.2 定向进化 | 第24-25页 |
| 1.4 木聚糖酶的应用 | 第25-27页 |
| 1.5 研究目的和意义 | 第27-28页 |
| 2 解淀粉芽孢杆菌木聚糖酶A基因（baxA）在大肠杆菌中的表达 | 第28-46页 |
| 2.1 材料 | 第28-29页 |
| 2.1.1 菌种和质粒 | 第28页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第28-29页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第29页 |
| 2.2 方法 | 第29-36页 |
| 2.2.1 baxA基因的扩增 | 第29-30页 |
| 2.2.2 阳性克隆子的构建与鉴定 | 第30-31页 |
| 2.2.3 大肠杆菌工程菌的构建与鉴定 | 第31-32页 |
| 2.2.4 pCbaxA15的放大培养 | 第32页 |
| 2.2.5 重组木聚糖酶reBaxA的分离纯化 | 第32页 |
| 2.2.6 酶活的测定 | 第32-33页 |
| 2.2.7 蛋白浓度的测定 | 第33页 |
| 2.2.8 标准曲线的测定 | 第33页 |
| 2.2.9 SDS-PAGE电泳 | 第33-34页 |
| 2.2.10 Western Blot鉴定 | 第34-35页 |
| 2.2.11 reBaxA酶学性质的测定 | 第35页 |
| 2.2.12 reBaxA的水解特性 | 第35-36页 |
| 2.3 结果与分析 | 第36-45页 |
| 2.3.1 baxA基因的扩增 | 第36-37页 |
| 2.3.2 阳性克隆子的筛选 | 第37-38页 |
| 2.3.3 大肠杆菌工程菌的构建与筛选 | 第38-39页 |
| 2.3.4 工程菌pCbaxA15的发酵曲线 | 第39-40页 |
| 2.3.5 SDS-PAGE和Western Blot分析 | 第40-41页 |
| 2.3.6 reBaxA酶学性质 | 第41-43页 |
| 2.3.7 reBaxA对不同木聚糖的水解作用 | 第43-45页 |
| 2.4 小结 | 第45-46页 |
| 3 baxA基因在毕赤酵母中的表达 | 第46-57页 |
| 3.1 材料 | 第46-47页 |
| 3.1.1 菌种和质粒 | 第46页 |
| 3.1.2 培养基和试剂 | 第46-47页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第47页 |
| 3.2 方法 | 第47-51页 |
| 3.2.1 pPICZαA-baxA-E. coli Top 10 的构建与鉴定 | 第47-49页 |
| 3.2.2 质粒pPICZαA-baxA的线性化 | 第49页 |
| 3.2.3 线性化pPICZαA-baxA的纯化浓缩 | 第49页 |
| 3.2.4 毕赤酵母感受态细胞的制备 | 第49-50页 |
| 3.2.5 电击转化与酵母工程菌的筛选 | 第50页 |
| 3.2.6 重组木聚糖酶rePPBaxA10的诱导表达 | 第50页 |
| 3.2.7 rePPBaxA10的分离纯化 | 第50页 |
| 3.2.8 SDS-PAGE电泳和Western Blot鉴定 | 第50-51页 |
| 3.2.9 reBaxA10酶学性质的测定 | 第51页 |
| 3.3 结果与分析 | 第51-56页 |
| 3.3.1 pPICZαA-baxA-E. coli Top 10 的构建 | 第51-52页 |
| 3.3.2 质粒pPICZαA-baxA的线性化 | 第52页 |
| 3.3.3 阳性酵母表达子的筛选 | 第52-53页 |
| 3.3.4 SDS-PAGE电泳和Western Blot分析 | 第53页 |
| 3.3.5 rePPBaxA10的酶学性质 | 第53-56页 |
| 3.4 小结 | 第56-57页 |
| 4 baxA基因的易错PCR突变 | 第57-69页 |
| 4.1 材料 | 第57-58页 |
| 4.1.1 菌种和质粒 | 第57页 |
| 4.1.2 培养基和试剂 | 第57页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第57-58页 |
| 4.2 方法 | 第58-61页 |
| 4.2.1 易错PCR突变文库的构建 | 第58-59页 |
| 4.2.2 突变文库的高通量筛选 | 第59页 |
| 4.2.3 突变体pCbaxA50的诱导表达 | 第59页 |
| 4.2.4 reBaxA50的分离纯化 | 第59页 |
| 4.2.5 SDS-PAGE电泳和Western Blot鉴定 | 第59-60页 |
| 4.2.6 热失活测定 | 第60页 |
| 4.2.7 差示扫描量热法（DSC）分析 | 第60页 |
| 4.2.8 reBaxA50的酶学性质 | 第60页 |
| 4.2.9 reBaxA50的水解特性 | 第60页 |
| 4.2.10 同源建模和结构分析 | 第60-61页 |
| 4.3 结果与分析 | 第61-68页 |
| 4.3.1 易错PCR突变文库的构建 | 第61页 |
| 4.3.2 高酶活突变体的筛选 | 第61-62页 |
| 4.3.3 SDS-PAGE电泳和Western Blot分析 | 第62-63页 |
| 4.3.4 reBaxA50的酶学性质 | 第63-65页 |
| 4.3.5 reBaxA50的Tm分析 | 第65-66页 |
| 4.3.6 reBaxA50对不同木聚糖的水解作用 | 第66-67页 |
| 4.3.7 reBaxA和reBaxA50的 3D结构模型 | 第67-68页 |
| 4.4 小结 | 第68-69页 |
| 5 baxA基因的DNA改组 | 第69-89页 |
| 5.1 材料 | 第69-70页 |
| 5.1.1 菌种和质粒 | 第69页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第69页 |
| 5.1.3 主要仪器 | 第69-70页 |
| 5.2 方法 | 第70-73页 |
| 5.2.1 待突变基因片段mbaxA，tfxCD的制备 | 第70页 |
| 5.2.2 DNA改组 | 第70-71页 |
| 5.2.3 DNA改组突变文库的构建 | 第71-72页 |
| 5.2.4 突变文库的高通量筛选 | 第72页 |
| 5.2.5 突变酶的诱导表达 | 第72页 |
| 5.2.6 突变酶的分离纯化 | 第72页 |
| 5.2.7 SDS-PAGE电泳和Western Blot鉴定 | 第72页 |
| 5.2.8 突变酶酶学性质的测定 | 第72-73页 |
| 5.2.9 突变酶的水解特性 | 第73页 |
| 5.2.10 同源建模 | 第73页 |
| 5.3 结果与分析 | 第73-88页 |
| 5.3.1 待突变基因mbaxA，tfxCD的制备 | 第73-74页 |
| 5.3.2 DNA改组突变文库的构建 | 第74页 |
| 5.3.3 突变体的筛选 | 第74-76页 |
| 5.3.4 SDS-PAGE电泳和Western Blot分析 | 第76-79页 |
| 5.3.5 突变酶的酶学性质 | 第79-83页 |
| 5.3.6 突变酶水解特性研究 | 第83-87页 |
| 5.3.7 不同位点氨基酸突变对木聚糖酶酶活的影响 | 第87-88页 |
| 5.4 小结 | 第88-89页 |
| 结论与展望 | 第89-91页 |
| 创新点 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-99页 |
| 作者简历 | 第99页 |
