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玉米ZmLTPL63基因的分离及功能鉴定

中文摘要第8-10页
Abstract第10-12页
1 前言第13-24页
    1.1 干旱和盐胁迫第13-16页
        1.1.1 干旱和盐胁迫对植物的危害第13-14页
        1.1.2 植物应对干旱和盐胁迫的机制第14-16页
    1.2 植物脂质转运蛋白第16-23页
        1.2.1 LTPs的结构和生化性质第16-17页
        1.2.2 LTPs的分类第17-19页
        1.2.3 LTPs体外脂质结合及转运第19-20页
        1.2.4 LTPs的生物学功能第20-23页
            1.2.4.1 LTPs参与蜡质合成及运输第20页
            1.2.4.2 LTPs参与生长发育调节第20-21页
            1.2.4.3 LTPs调节生物胁迫抗性第21页
            1.2.4.4 LTPs调节非生物胁迫抗性第21-23页
            1.2.4.5 LTPs的其他生物学功能第23页
    1.3 本研究的目的及意义第23-24页
2 材料与方法第24-40页
    2.1 实验材料第24-26页
        2.1.1 植物材料第24页
        2.1.2 菌株与质粒第24页
        2.1.3 酶和各种生化试剂第24页
        2.1.4 主要仪器设备第24-25页
        2.1.5 工具软件与数据库第25页
        2.1.6 PCR引物第25-26页
    2.2 实验方法第26-40页
        2.2.1 玉米的培养与处理第26-27页
        2.2.2 植物总RNA的提取第27-28页
        2.2.3 植物基因组DNA的提取第28页
        2.2.4 cDNA的合成第28-29页
        2.2.5 荧光定量PCR第29页
        2.2.6 克隆载体的构建第29-31页
            2.2.6.1 目的片段的PCR扩增第29-30页
            2.2.6.2 扩增产物的胶回收第30页
            2.2.6.3 目的片段与克隆载体的连接第30-31页
        2.2.7 大肠杆菌感受态的制备第31页
        2.2.8 大肠杆菌的转化第31-32页
        2.2.9 目的基因的测序第32页
        2.2.10 大肠杆菌质粒的提取第32页
        2.2.11 植物重组表达载体的构建第32-33页
        2.2.12 农杆菌感受态的制备第33-34页
        2.2.13 农杆菌感受态的转化第34页
        2.2.14 农杆菌介导的花序侵染法转化拟南芥第34-35页
        2.2.15 转基因拟南芥鉴定第35页
        2.2.16 转基因拟南芥的干旱及盐胁迫处理第35-36页
        2.2.17 H_2O_2和O~(2-)的染色观察第36页
        2.2.18 MDA含量测定第36页
        2.2.19 抗氧化酶活性测定第36-37页
        2.2.20 ZmLTPL63融合GFP表达载体的构建第37-38页
        2.2.21 Zm LTPL63的烟草表皮亚细胞定位第38页
        2.2.22 外源基因在烟草叶片中的瞬时表达第38-39页
        2.2.23 烟草叶片脂肪酸的提取与检测第39页
        2.2.24 GUS组织化学染色分析第39-40页
3 结果与分析第40-64页
    3.1 玉米ZmLTPL63基因的克隆及序列分析第40-44页
        3.1.1 玉米ZmLTPL63 cDNA的分离第40-41页
        3.1.2 玉米ZmLTPL63 cDNA序列分析第41-42页
        3.1.3 玉米ZmLTPL63蛋白序列分析第42页
        3.1.4 玉米ZmLTPL63蛋白序列相似性及其进化分析第42-44页
    3.2 玉米Zm LTPL63蛋白的亚细胞定位分析第44-45页
    3.3 玉米ZmLTPL63基因的表达特性分析第45-47页
        3.3.1 ZmLTPL63基因表达的组织特异性第45页
        3.3.2 ZmLTPL63基因表达的非生物胁迫及相关激素响应特性第45-47页
    3.4 玉米ZmLTPL63基因启动子的克隆及功能鉴定第47-52页
        3.4.1 ZmLTPL63基因启动子的克隆第47-48页
        3.4.2 ZmLTPL63基因启动子元件分析第48-50页
        3.4.3 ZmLTPL63基因启动子的表达调控活性鉴定第50-52页
    3.5 超表达ZmLTPL63转基因拟南芥的获得第52-54页
        3.5.1 ZmLTPL63植物表达载体的构建第52-53页
        3.5.2 超表达ZmLTPL63转基因纯合拟南芥的获得第53-54页
    3.6 超表达ZmLTPL63调控非生物胁迫抗性第54-61页
        3.6.1 超表达ZmLTPL63提高拟南芥的抗旱性第54-59页
        3.6.2 超表达ZmLTPL63提高拟南芥的抗盐性第59-60页
        3.6.3 ZmLTPL63超表达拟南芥对H_2O_2抗性分析第60-61页
    3.7 ZmLTPL63表达对脂肪酸代谢的影响第61-62页
    3.8 超表达ZmLTPL63调节拟南芥的生长发育第62-64页
4 讨论第64-67页
5 结论第67-68页
参考文献第68-80页
致谢第80页

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