| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 文献综述 | 第13-25页 |
| 第一章 猪繁殖与呼吸综合征及其病原的研究进展 | 第13-25页 |
| 1.1 PRRS的简介 | 第13-14页 |
| 1.1.1 PRRS的历史 | 第13-14页 |
| 1.1.2 PRRS的临床症状 | 第14页 |
| 1.2 PRRSV的病原学研究 | 第14-16页 |
| 1.2.1 PRRSV的分类地位 | 第14-15页 |
| 1.2.2 PRRSV的形态特征和理化特性 | 第15页 |
| 1.2.3 PRRSV的生物学特性 | 第15-16页 |
| 1.3 PRRS的流行病学研究 | 第16-18页 |
| 1.3.1 PRRSV的传染源和传播途径 | 第16-17页 |
| 1.3.3 PRRS的国内流行情况 | 第17-18页 |
| 1.4 PRRSV的分子生物学研究 | 第18-23页 |
| 1.4.1 PRRSV的基因组结构 | 第18页 |
| 1.4.2 PRRSV的非结构蛋白 | 第18-19页 |
| 1.4.3 PRRSV的结构蛋白 | 第19-22页 |
| 1.4.4 PRRSV基因的变异 | 第22-23页 |
| 1.5 PRRS诊断方法的研究 | 第23-24页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第24-25页 |
| 试验研究 | 第25-63页 |
| 第二章 2015～2016 年我国部分地区猪群PRRSV的分子检测及ORF5基因的遗传变异分析 | 第25-39页 |
| 2.1 试验材料 | 第25-27页 |
| 2.1.1 试验病料采集 | 第25页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.3 主要试验设备仪器 | 第26页 |
| 2.1.4 相关试验试剂的配制 | 第26页 |
| 2.1.5 PRRSV参考毒株序列 | 第26-27页 |
| 2.2 试验方法 | 第27-29页 |
| 2.2.1 病料的采集与处理 | 第27页 |
| 2.2.2 引物设计 | 第27页 |
| 2.2.3 病毒RNA的提取 | 第27-28页 |
| 2.2.4 RT-PCR检测PRRSV | 第28页 |
| 2.2.5 PCR产物的凝胶电泳 | 第28-29页 |
| 2.2.6 阳性样品RT-PCR扩增ORF5基因 | 第29页 |
| 2.2.7 序列的测定与分析 | 第29页 |
| 2.3 试验结果 | 第29-37页 |
| 2.3.1 PRRSV病原检测结果 | 第29-30页 |
| 2.3.2 PRRS的空间分布 | 第30-31页 |
| 2.3.3 不同种群PRRS的流行情况 | 第31页 |
| 2.3.4 ORF5基因RT-PCR扩增及毒株分类 | 第31-32页 |
| 2.3.5 毒株的分类及分布 | 第32页 |
| 2.3.6 ORF5基因核苷酸同源性分析 | 第32-33页 |
| 2.3.7 ORF5基因推导的氨基酸同源性分析 | 第33-34页 |
| 2.3.8 ORF5基因推导氨基酸的变异分析 | 第34-35页 |
| 2.3.9 ORF5基因序列的遗传演化分析 | 第35-37页 |
| 2.4 讨论 | 第37-38页 |
| 2.5 小结 | 第38-39页 |
| 第三章 NADC30-like毒株的分离鉴定 | 第39-48页 |
| 3.1 试验材料 | 第39-41页 |
| 3.1.1 病料的收集 | 第39页 |
| 3.1.2 细胞 | 第39页 |
| 3.1.3 主要使用试剂 | 第39-40页 |
| 3.1.4 主要的仪器设备 | 第40页 |
| 3.1.5 主要使用试剂的配制 | 第40-41页 |
| 3.2 试验方法 | 第41-43页 |
| 3.2.1 样品的处理 | 第41页 |
| 3.2.2 引物的设计 | 第41页 |
| 3.2.3 细胞的培养 | 第41-42页 |
| 3.2.4 病毒的分离培养 | 第42页 |
| 3.2.5 分离病毒的检测 | 第42-43页 |
| 3.2.6 外源病毒的检测 | 第43页 |
| 3.2.7 TCID_(50)的测定 | 第43页 |
| 3.3 试验结果 | 第43-46页 |
| 3.3.1 病毒的分离培养结果 | 第43-44页 |
| 3.3.2 RT-PCR鉴定病毒增殖结果 | 第44页 |
| 3.3.3 外源病毒检测结果 | 第44-45页 |
| 3.3.4 TCID_(50)测定结果 | 第45-46页 |
| 3.4 讨论 | 第46-47页 |
| 3.5 小结 | 第47-48页 |
| 第四章 PRRSV NADC30-like毒株GP5蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第48-63页 |
| 4.1 试验材料 | 第48-52页 |
| 4.1.1 病毒与阳性血清 | 第48页 |
| 4.1.2 载体与菌株 | 第48页 |
| 4.1.3 主要使用的仪器设备 | 第48-49页 |
| 4.1.4 主要试剂与工具酶 | 第49页 |
| 4.1.5 试验所用溶液的配制 | 第49-52页 |
| 4.2 试验方法 | 第52-57页 |
| 4.2.1 目的片段的扩增 | 第52-54页 |
| 4.2.2 原核表达载体的构建 | 第54-55页 |
| 4.2.3 重组载体的诱导表达 | 第55页 |
| 4.2.4 诱导表达条件的优化 | 第55页 |
| 4.2.5 目的蛋白可溶性的鉴定 | 第55-56页 |
| 4.2.6 表达产物的鉴定 | 第56-57页 |
| 4.3 试验结果 | 第57-61页 |
| 4.3.1 重组质粒TOPO-ORF5的鉴定 | 第57-58页 |
| 4.3.2 目的片段的扩增结果 | 第58页 |
| 4.3.3 重组质粒pGEX-dORF5的鉴定 | 第58-59页 |
| 4.3.4 最佳诱导表达时间的鉴定 | 第59-60页 |
| 4.3.5 目的蛋白可溶性的鉴定结果 | 第60页 |
| 4.3.6 重组表达产物Western blot鉴定 | 第60-61页 |
| 4.4 讨论 | 第61-62页 |
| 4.5 小结 | 第62-63页 |
| 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-72页 |
| 附录 | 第72-75页 |
| 缩略词表 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 个人简介 | 第77页 |
