| 中文摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略词表 | 第9-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-26页 |
| 1 PCV的病原学特征 | 第14-16页 |
| 1.1 PCV的发现 | 第14-15页 |
| 1.2 PCV形态及理化特性 | 第15页 |
| 1.3 培养特性 | 第15页 |
| 1.4 PCV基因组结构特征 | 第15-16页 |
| 1.5 PCV的复制 | 第16页 |
| 2 PCV2的致病机制 | 第16-17页 |
| 3 PCV2的流行及相关疾病 | 第17-19页 |
| 3.1 PCV2的流行情况 | 第17页 |
| 3.2 PCV2的相关疾病 | 第17-19页 |
| 3.2.1 断奶仔猪多系统衰竭综合症(PMWS) | 第17-18页 |
| 3.2.2 猪皮炎与肾病综合征(PDNS) | 第18页 |
| 3.2.3 增生和坏死性肺炎(PNP) | 第18页 |
| 3.2.4 繁殖障碍病(Reproductive failure) | 第18页 |
| 3.2.5 仔猪先天性震颤(CT) | 第18-19页 |
| 4 PCV2的实验室检测技术研究进展 | 第19-23页 |
| 4.1 PCV2免疫学诊断方法 | 第19-20页 |
| 4.1.1 免疫组织化学技术(Immunohistochemistry,IHC) | 第19页 |
| 4.1.2 间接免疫荧光技术(Immunofluorescence assay,IFA) | 第19页 |
| 4.1.3 过氧化物酶单层试验(Immunoperoxidase monolayer assay,IPMA) | 第19-20页 |
| 4.1.4 酶联免疫吸附技术(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA) | 第20页 |
| 4.2 分子生物学诊断技术 | 第20-23页 |
| 4.2.1 聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR) | 第20-22页 |
| 4.2.2 限制性片段长度多态性(restrictionfragment length polymorphism,RFLP) | 第22页 |
| 4.2.3 核酸环介导等温扩增技术(Loop-Mediated Isothermal Amplification,LAMP) | 第22-23页 |
| 4.2.4 原位杂交技术(Nucleic acid probe and in situ hybridization,ISH) | 第23页 |
| 4.2.5 基因芯片技术 | 第23页 |
| 5 微滴式数字PCR技术(droplet digital PCR,ddPCR) | 第23-25页 |
| 5.1 技术原理及优势 | 第24页 |
| 5.2 研究进展 | 第24-25页 |
| 6 研究目的与意义 | 第25-26页 |
| 第二章 猪圆环病毒2型微滴式数字PCR检测方法的建立 | 第26-43页 |
| 1 实验材料 | 第26-27页 |
| 1.1 实验仪器 | 第26-27页 |
| 1.2 主要试剂 | 第27页 |
| 1.3 实验样品 | 第27页 |
| 2 实验方法 | 第27-33页 |
| 2.1 引物和探针的设计与合成 | 第27-28页 |
| 2.2 病毒核酸的提取 | 第28页 |
| 2.3 RNA反转录 | 第28-29页 |
| 2.4 重组质粒标准品的制备 | 第29-30页 |
| 2.4.1 目的片段的扩增 | 第29页 |
| 2.4.2 目的片段的回收与纯化 | 第29页 |
| 2.4.3 纯化产物连接与转化 | 第29页 |
| 2.4.4 感受态细胞的制备 | 第29-30页 |
| 2.5 qPCR检测条件的确定 | 第30页 |
| 2.6 ddPCR检测方法的建立 | 第30-33页 |
| 2.6.1 ddPCR的工作流程 | 第30-31页 |
| 2.6.2 ddPCR反应条件的优化 | 第31-32页 |
| 2.6.3 标准曲线的建立及对比 | 第32页 |
| 2.6.4 特异性试验 | 第32页 |
| 2.6.5 敏感性试验 | 第32页 |
| 2.6.6 重复性试验 | 第32-33页 |
| 3 结果 | 第33-41页 |
| 3.1 重组质粒标准品的制备 | 第33页 |
| 3.2 qPCR反应条件的优化 | 第33-35页 |
| 3.2.1 退火温度优化 | 第33-34页 |
| 3.2.2 引物浓度优化 | 第34页 |
| 3.2.3 探针浓度优化 | 第34-35页 |
| 3.3 ddPCR反应条件的优化 | 第35-37页 |
| 3.3.1 退火温度优化 | 第35-36页 |
| 3.3.2 引物浓度的优化 | 第36页 |
| 3.3.3 探针浓度的优化 | 第36-37页 |
| 3.4 ddPCR与qPCR标准曲线的建立及对比 | 第37-38页 |
| 3.5 特异性试验 | 第38-39页 |
| 3.6 敏感性试验 | 第39-40页 |
| 3.7 重复性试验 | 第40-41页 |
| 4 分析与讨论 | 第41-42页 |
| 5 小结 | 第42-43页 |
| 第三章 猪圆环病毒2型微滴式数字PCR检测方法的初步应用 | 第43-51页 |
| 1 材料和方法 | 第43-46页 |
| 1.1 临床样品采集 | 第43页 |
| 1.2 主要试剂及耗材 | 第43-44页 |
| 1.3 主要实验仪器 | 第44页 |
| 1.4 实验方法 | 第44-46页 |
| 1.4.1 组织样品处理 | 第44页 |
| 1.4.2 病毒DNA提取 | 第44-45页 |
| 1.4.3 ddPCR检测方法临床应用 | 第45-46页 |
| 2 结果 | 第46-48页 |
| 2.1 临床血清样品检测 | 第46-47页 |
| 2.2 不同脏器组织中PCV2含量检测 | 第47页 |
| 2.3 PCV2疫苗半成品病毒含量检测 | 第47-48页 |
| 3 分析与讨论 | 第48-50页 |
| 4 小结 | 第50-51页 |
| 结论与创新点 | 第51-52页 |
| 1 结论 | 第51页 |
| 2 创新点 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第60页 |
