| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-23页 |
| ·喜树 | 第11-14页 |
| ·喜树的形态特征 | 第11-12页 |
| ·喜树的资源分布现状 | 第12-13页 |
| ·喜树应用 | 第13页 |
| ·医药应用 | 第13页 |
| ·园林应用 | 第13页 |
| ·木材应用 | 第13页 |
| ·喜树育苗 | 第13-14页 |
| ·喜树研究概况 | 第14页 |
| ·喜树碱 | 第14-19页 |
| ·喜树碱及其衍生物的理化性质 | 第14-15页 |
| ·喜树碱及其衍生物的结构 | 第15页 |
| ·喜树碱及其衍生物的应用及发展 | 第15-16页 |
| ·喜树碱及其衍生物的提取、检测方法 | 第16-17页 |
| ·喜树碱的合成途径 | 第17-19页 |
| ·VIGS | 第19-20页 |
| ·VIGS定义 | 第19页 |
| ·VIGS原理 | 第19页 |
| ·VIGS分类 | 第19-20页 |
| ·VIGS优缺点 | 第20页 |
| ·VIGS应用范围及发展趋势 | 第20页 |
| ·目的基因的选择 | 第20-22页 |
| ·共表达分析 | 第20-21页 |
| ·目的基因的筛选原则 | 第21页 |
| ·TRV-VIGS基因设计原则 | 第21-22页 |
| ·论文研究的目的、内容及意义 | 第22-23页 |
| 第二章 方法与材料 | 第23-42页 |
| ·实验材料 | 第23-28页 |
| ·材料 | 第23页 |
| ·引物 | 第23-25页 |
| ·仪器 | 第25-26页 |
| ·培养基 | 第26-27页 |
| ·常用缓冲液及试剂配方 | 第27-28页 |
| ·实验方法 | 第28-42页 |
| ·种子的萌发 | 第28-29页 |
| ·目的基因的克隆与序列分析 | 第29-34页 |
| ·目的基因的确定 | 第29页 |
| ·喜树植物RNA的提取 | 第29-30页 |
| ·目的基因扩增 | 第30-32页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳DNA回收 | 第32页 |
| ·目的基因与pGM-T Vector的TA克隆 | 第32-33页 |
| ·大肠杆菌XL-10 Gold超级感受态制备 | 第33页 |
| ·重组质粒的大肠杆菌XL-10 Gold超级感受态转化 | 第33页 |
| ·重组克隆质粒的菌落PCR鉴定 | 第33-34页 |
| ·质粒提取（碱裂解法） | 第34-35页 |
| ·酶切及VIGS载体构建 | 第35-37页 |
| ·EcoRⅠ酶切 | 第35页 |
| ·琼脂糖凝胶DNA回收 | 第35页 |
| ·载体pTRV2去磷酸化 | 第35-36页 |
| ·重组质粒构建 | 第36页 |
| ·大肠杆菌转化 | 第36-37页 |
| ·重组VIGS质粒的菌落PCR鉴定及质粒提取 | 第37页 |
| ·VIGS实验 | 第37-39页 |
| ·农杆菌GV3101转化 | 第37-38页 |
| ·VIGS载体农杆菌侵染喜树叶片 | 第38页 |
| ·农杆菌侵染喜树叶片的方式 | 第38-39页 |
| ·喜树叶片VIGS处理后的代谢产物检测 | 第39-40页 |
| ·叶片喜树碱的粗提取 | 第39页 |
| ·叶片喜树碱薄层层析检测 | 第39页 |
| ·叶片喜树碱与 10-羟基喜树碱的HPLC检测及标准曲线绘制 | 第39-40页 |
| ·叶片喜树碱合成酶基因的qRT-PCR处理 | 第40-41页 |
| ·喜树叶片RNA提取 | 第40页 |
| ·喜树叶片第一链cDNA合成 | 第40页 |
| ·喜树叶片基因实时定量荧光PCR分析 | 第40-41页 |
| ·共表达分析喜树碱合成途径酶基因 | 第41-42页 |
| 第三章 结果与分析 | 第42-59页 |
| ·目的基因的克隆与序列分析 | 第42-44页 |
| ·喜树总RNA分析 | 第42页 |
| ·RT-PCR扩增基因 | 第42-44页 |
| ·目的基因与载体pGM-T Vector的TA克隆 | 第44-45页 |
| ·重组质粒pGMT及VIGS载体pTRV2的酶切鉴定 | 第45-46页 |
| ·TRV-VIGS载体的构建 | 第46-48页 |
| ·构建VIGS载体 | 第46-47页 |
| ·构建VIGS载体基因插入方向鉴定 | 第47-48页 |
| ·VIGS载体转化农杆菌 | 第48-50页 |
| ·CaPDS-VIGS处理的叶片表型及基因表达变化 | 第50-51页 |
| ·喜树碱合成途径酶基因VIGS处理叶片的检测 | 第51-57页 |
| ·VIGS实验中转化农杆菌菌体浓度及菌落PCR检测 | 第51-52页 |
| ·VIGS处理叶片的高效液相色谱检测 | 第52-55页 |
| ·喜树碱及 10-羟基喜树碱高效液相色谱检测及标准曲线 | 第52-53页 |
| ·不同喜树植株叶片喜树碱及 10-羟基喜树碱积累量 | 第53-54页 |
| ·TRV-VIGS处理叶片的喜树碱及 10-羟基喜树碱HPLC检测分析 | 第54-55页 |
| ·TRV-VIGS处理叶片实时定量荧光PCR分析 | 第55-57页 |
| ·共表达分析筛选细胞色素P450基因 | 第57-59页 |
| 第四章 讨论与结论 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 附录A | 第68-70页 |
| 附录B | 第70-71页 |
| 附录C | 第71页 |
