| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 第一章 综述 | 第13-22页 |
| ·低温胁迫 | 第13-14页 |
| ·植物膜脂与耐寒性 | 第14页 |
| ·植物耐寒功能基因研究 | 第14-18页 |
| ·耐寒调控型基因 | 第15-16页 |
| ·耐寒功能性基因 | 第16-18页 |
| ·GPAT研究进展 | 第18-20页 |
| ·耐寒植物新疆沙冬青的研究 | 第20页 |
| ·研究目的及意义 | 第20-22页 |
| 第二章 新疆沙冬青AnGPAT基因克隆与序列分析 | 第22-36页 |
| ·材料 | 第22-23页 |
| ·植物材料 | 第22页 |
| ·质粒与菌株 | 第22页 |
| ·酶和试剂 | 第22页 |
| ·溶液和培养基配制 | 第22页 |
| ·实验仪器 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-27页 |
| ·新疆沙冬青快繁苗培养 | 第23页 |
| ·新疆沙冬青总RNA提取 | 第23-24页 |
| ·反转录合成第一链cDNA | 第24页 |
| ·新疆沙冬青GPAT基因的PCR扩增 | 第24-25页 |
| ·PCR产物的胶回收 | 第25页 |
| ·TA克隆 | 第25-26页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第26-27页 |
| ·结果 | 第27-35页 |
| ·AnGPAT基因克隆 | 第27页 |
| ·AnGPAT基因序列分析 | 第27-29页 |
| ·GPAT_N结构域 | 第29-30页 |
| ·LPLAT结构域 | 第30-31页 |
| ·AnGPAT蛋白亚细胞定位预测 | 第31页 |
| ·AnGPAT蛋白质膜定位预测 | 第31-32页 |
| ·AnGPAT蛋白结构预测 | 第32-33页 |
| ·AnGPAT进化分析及同源性比对 | 第33-35页 |
| ·讨论 | 第35-36页 |
| 第三章 AnGPAT基因的体外表达 | 第36-53页 |
| ·材料 | 第36-37页 |
| ·菌种与载体 | 第36页 |
| ·酶和试剂 | 第36页 |
| ·溶液和培养基配制 | 第36-37页 |
| ·实验仪器 | 第37页 |
| ·AnGPAT基因原核表达 | 第37-40页 |
| ·甘油菌复苏 | 第37页 |
| ·, 鉴定重组质粒 | 第37-38页 |
| ·AnGPAT基因的诱导表达 | 第38页 |
| ·pET30a-AnGPAT/BL21大肠杆菌脂肪酸含量测定 | 第38-39页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测 | 第39-40页 |
| ·AnGPAT蛋白的纯化 | 第40页 |
| ·AnGPAT基因的真核表达 | 第40-45页 |
| ·pPIC9-AnGPAT酵母表达载体构建 | 第40-43页 |
| ·pPIC9-GPAT重组质粒转化毕赤酵母GS115 | 第43-44页 |
| ·转AnGPAT基因的毕赤酵母诱导表达 | 第44页 |
| ·AnGPAT重组蛋白的纯化 | 第44-45页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测 | 第45页 |
| ·体外表达AnGPAT蛋白Western blot检测 | 第45-46页 |
| ·结果 | 第46-52页 |
| ·pET30a-AnGPAT重组质粒 | 第46-47页 |
| ·pET30a-AnGPAT菌落PCR检测 | 第47页 |
| ·AnGPAT原核表达蛋白的SDS-PAGE电泳检测 | 第47-48页 |
| ·pPIC9-AnGPAT重组质粒 | 第48-49页 |
| ·pPIC9-AnGPAT菌落PCR检测 | 第49-50页 |
| ·AnGPAT酵母真核表达的SDS-PAGE电泳检测结果 | 第50页 |
| ·pET30a-AnGPAT/BL21大肠杆菌脂肪酸含量测定 | 第50-51页 |
| ·AnGPAT蛋白Western blot检测 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52-53页 |
| 第四章 AnGPAT基因载体构建及遗传转化 | 第53-65页 |
| ·材料 | 第53-54页 |
| ·菌种、载体与转基因植物 | 第53页 |
| ·酶和试剂 | 第53页 |
| ·溶液和培养基配制 | 第53页 |
| ·实验仪器 | 第53-54页 |
| ·实验方法 | 第54-61页 |
| ·PBI121-AnGPAT真核表达载体构建 | 第54-57页 |
| ·PBI121-AnGPAT重组质粒转化农杆菌LBA4404 | 第57-58页 |
| ·转AnGPAT基因农杆菌侵染烟草 | 第58-59页 |
| ·转AnGPAT基因烟草检测 | 第59-61页 |
| ·结果 | 第61-63页 |
| ·pBI121-AnGPAT重组质粒 | 第61页 |
| ·转AnGPAT基因农杆菌PCR检测 | 第61-62页 |
| ·转AnGPAT基因农杆菌质粒双酶切检测 | 第62-63页 |
| ·转基因烟草AnGPAT基因检测 | 第63页 |
| ·讨论 | 第63-65页 |
| 第五章 结论 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
