摘要 | 第1-9页 |
ABSTRACT | 第9-11页 |
缩略词(Abbreviation) | 第11-12页 |
1 前言 | 第12-22页 |
·EHEC O157:H7 和空肠弯曲菌的危害与流行 | 第12-14页 |
·EHEC O157:H7 的危害与流行 | 第12-13页 |
·空肠弯曲菌的危害与流行 | 第13-14页 |
·检测方法 | 第14-17页 |
·分离培养法 | 第14-15页 |
·免疫学方法 | 第15-16页 |
·分子生物学方法 | 第16-17页 |
·LAMP技术 | 第17-19页 |
·LAMP技术的优点 | 第18-19页 |
·LAMP技术的应用 | 第19页 |
·DNA提取方法 | 第19-20页 |
·磁性分离技术 | 第20-21页 |
·研究目的与意义 | 第21-22页 |
2 实验材料 | 第22-24页 |
·菌株 | 第22页 |
·培养基 | 第22页 |
·主要试剂 | 第22-23页 |
·主要器材 | 第23页 |
·主要溶液配制 | 第23-24页 |
3 实验方法 | 第24-31页 |
·细菌基因组提取 | 第24页 |
·细菌基因组试剂盒法提取 | 第24页 |
·细菌基因组热煮沸法提取 | 第24页 |
·PCR引物设计与合成 | 第24-25页 |
·HNB-LAMP检测方法的建立及评价 | 第25-26页 |
·LAMP靶基因选择 | 第25页 |
·LAMP引物设计 | 第25页 |
·LAMP反应体系优化 | 第25页 |
·HNB-LAMP检测方法的特异性试验 | 第25-26页 |
·HNB-LAMP检测方法的灵敏度试验 | 第26页 |
·HNB-LAMP方法检测EHEC O157:H7 临床分离株试验 | 第26页 |
·氨基磁珠的合成 | 第26-28页 |
·裸Fe_3O_4磁性纳米粒子的合成 | 第26-27页 |
·二氧化硅包裹Fe_3O_4磁性纳米粒子的合成 | 第27页 |
·去除未被硅包裹的Fe_3O_4磁性纳米粒子 | 第27页 |
·氨基修饰的硅包Fe_3O_4磁性纳米粒子的合成 | 第27-28页 |
·氨基磁珠的表征 | 第28页 |
·傅里叶红外光谱分析 | 第28页 |
·X射线衍射分析 | 第28页 |
·透射电镜分析 | 第28页 |
·氨基磁珠吸附DNA条件 | 第28-29页 |
·氨基磁珠提取细菌基因组DNA | 第28页 |
·最佳吸附pH | 第28页 |
·最佳吸附温度 | 第28-29页 |
·最佳吸附时间 | 第29页 |
·最佳氨基磁珠添加量 | 第29页 |
·人工污染样品检测 | 第29-31页 |
·氨基磁珠提取人工污染牛奶DNA | 第29页 |
·氨基磁珠提取人工污染肉样DNA | 第29-30页 |
·PCR/LAMP检测 | 第30-31页 |
4 结果与分析 | 第31-49页 |
·LAMP检测方法的建立及评价 | 第31-39页 |
·LAMP靶基因选择 | 第31页 |
·LAMP引物设计 | 第31-32页 |
·LAMP反应体系优化 | 第32-36页 |
·HNB-LAMP检测方法的特异性试验 | 第36-37页 |
·HNB-LAMP检测方法的灵敏度试验 | 第37-39页 |
·HNB-LAMP方法检测EHEC O157:H7 临床分离株试验 | 第39页 |
·氨基磁珠的表征 | 第39-41页 |
·氨基磁珠的红外光谱分析 | 第39-40页 |
·氨基磁珠的X射线衍射分析 | 第40-41页 |
·氨基磁珠的TEM表征 | 第41页 |
·氨基磁珠吸附DNA条件 | 第41-44页 |
·最佳吸附pH | 第41-42页 |
·最佳吸附温度 | 第42页 |
·最佳吸附时间 | 第42-43页 |
·氨基磁珠添加量对PCR灵敏度的影响 | 第43-44页 |
·人工污染样品检测 | 第44-49页 |
·氨基磁珠-LAMP检测O157 人工污染牛奶样品 | 第44-45页 |
·氨基磁珠-PCR检测O157 人工污染牛奶样品 | 第45-46页 |
·氨基磁珠-LAMP检测O157 人工污染猪肉样品 | 第46页 |
·氨基磁珠-PCR检测O157 人工污染猪肉样品 | 第46-47页 |
·氨基磁珠-LAMP检测空肠弯曲菌人工污染鸡肉样品 | 第47-48页 |
·氨基磁珠-PCR检测空肠弯曲菌人工污染鸡肉样品 | 第48-49页 |
5 讨论 | 第49-54页 |
·靶基因的选择 | 第49-50页 |
·LAMP方法建立的思考 | 第50-51页 |
·LAMP方法的选择 | 第50页 |
·LAMP显色剂的选择 | 第50-51页 |
·样品前处理方法 | 第51-53页 |
·氨基磁珠与硫氰酸胍 | 第51-52页 |
·不同样品处理方式 | 第52-53页 |
·检测方法评价 | 第53-54页 |
结论 | 第54-55页 |
参考文献 | 第55-61页 |
致谢 | 第61页 |