| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-23页 |
| 1 灰葡萄孢的研究进展 | 第12-20页 |
| ·灰霉病的危害现状 | 第12-13页 |
| ·灰霉病病原灰葡萄孢概况 | 第13页 |
| ·灰葡萄孢的致病因子 | 第13-18页 |
| ·侵染结构 | 第13-14页 |
| ·细胞壁降解酶 | 第14-15页 |
| ·诱导寄主植物细胞死亡 | 第15-18页 |
| ·灰葡萄孢的菌核形成相关因子 | 第18-19页 |
| ·灰霉病的防治 | 第19-20页 |
| 2 甲基化修饰 | 第20-22页 |
| 3 研究目的及意义 | 第22-23页 |
| 第二章 灰葡萄孢中基因敲除和互补转化子的获得与验证 | 第23-52页 |
| 1 试验材料 | 第23-26页 |
| ·菌株 | 第23页 |
| ·培养基 | 第23-24页 |
| ·载体 | 第24页 |
| ·试剂 | 第24-25页 |
| ·生物酶 | 第25页 |
| ·实验仪器 | 第25-26页 |
| 2 试验方法 | 第26-37页 |
| ·基因获得 | 第26页 |
| ·基因表达量检测 | 第26-28页 |
| ·总RNA提取 | 第26-27页 |
| ·c DNA的合成 | 第27页 |
| ·q RT-PCR检测基因的表达 | 第27-28页 |
| ·基因敲除转化子的获得 | 第28-32页 |
| ·同源重组原理 | 第28页 |
| ·基因敲除转化片段的获得 | 第28-31页 |
| ·PEG介导的灰葡萄孢原生质体转化 | 第31-32页 |
| ·灰葡萄孢基因敲除转化子的验证 | 第32-35页 |
| ·基因敲除转化子的PCR验证 | 第32-33页 |
| ·敲除转化子的RT-PCR验证 | 第33页 |
| ·敲除转化子的Southern blot验证 | 第33-35页 |
| ·Bcdim-5 基因互补转化子的获得与验证 | 第35-37页 |
| ·Bcdim-5 互补载体的构建 | 第35页 |
| ·农杆菌介导的灰葡萄孢转化 | 第35-36页 |
| ·Bcdim-5 基因互补转化子的验证 | 第36-37页 |
| 3 试验结果与分析 | 第37-50页 |
| ·灰葡萄孢中Bcdim-2、Bchp1和Bcdim-5 基因的序列分析 | 第37-41页 |
| ·Bcdim-2 基因序列分析 | 第37页 |
| ·Bchp1基因序列分析 | 第37-39页 |
| ·Bcdim-5 基因序列分析 | 第39-41页 |
| ·基因表达模式 | 第41页 |
| ·基因敲除转化子的获得与验证 | 第41-50页 |
| ·Bcdim-2 基因敲除转化子的获得与验证 | 第41-45页 |
| ·Bchp1基因敲除转化子的获得与验证 | 第45-47页 |
| ·Bcdim-5 基因敲除转化子的获得与验证 | 第47-49页 |
| ·Bcdim-5 基因敲除转化子的互补 | 第49-50页 |
| 4 小结与讨论 | 第50-52页 |
| 第三章 灰葡萄孢中Bcdim-2、Bchp1和Bcdim-5 基因功能初探 | 第52-63页 |
| 1 试验材料 | 第52页 |
| ·试验菌株 | 第52页 |
| ·培养基 | 第52页 |
| 2 试验方法 | 第52-54页 |
| ·菌丝生长速度测定 | 第52页 |
| ·转化子菌丝尖端形态 | 第52页 |
| ·转化子产孢量测定 | 第52-53页 |
| ·转化子菌落形态观察 | 第53页 |
| ·转化子菌核产量测定 | 第53页 |
| ·转化子致病力测定 | 第53页 |
| ·Bcdim-5 敲除转化子中致病相关基因表达情况 | 第53-54页 |
| 3 试验结果 | 第54-61页 |
| ·转化子的菌丝生长速度 | 第54页 |
| ·转化子的菌丝尖端形态 | 第54-55页 |
| ·转化子分生孢子产生情况 | 第55-56页 |
| ·转化子的菌落形态及菌核形成 | 第56-58页 |
| ·转化子的致病力测定 | 第58-61页 |
| ·转化子在拟南芥离体叶片上致病力测定 | 第58-60页 |
| ·转化子在番茄和大豆离体叶片上致病力测定 | 第60-61页 |
| ·Bcdim-5 敲除转化子中致病相关基因的表达 | 第61页 |
| 4 小结与讨论 | 第61-63页 |
| 讨论 | 第63-65页 |
| 总结与展望 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 附录一常用试验操作方法 | 第81-84页 |
| 附录二引物 | 第84-85页 |
