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应用拟南芥CDPK1基因提高马铃薯抗旱性的研究

摘要第1-4页
abstract第4-12页
1 前言第12-26页
   ·植物耐旱的机理第12-13页
   ·植物对干旱胁迫的适应及相关信号的感知第13页
   ·植物钙信号转导中的钙依赖蛋白激酶(CDPKs)第13-17页
     ·钙离子与钙依赖蛋白激酶的关系第13-14页
     ·CDPKs的生理功能第14-17页
   ·植物耐旱基因工程研究进展第17-19页
     ·与植物响应干旱胁迫相关的蛋白激酶第17页
     ·与渗透调节物质积累相关的基因第17-19页
     ·编码转录因子的调节基因第19页
   ·马铃薯基因工程研究进展第19-22页
     ·马铃薯抗虫第19页
     ·马铃薯抗病毒病第19-20页
     ·马铃薯抗真菌和细菌病第20页
     ·马铃薯抗除草剂第20页
     ·马铃薯品质改良第20-21页
     ·马铃薯抗逆性第21页
     ·其他基因工程技术在马铃薯中的应用第21-22页
   ·植物中应用的启动子研究进展第22-24页
     ·组成型表达的启动子第22页
     ·诱导型表达的启动子第22-23页
     ·组织特异型启动子第23-24页
   ·本研究的目的意义、研究内容及技术路线第24-26页
2 马铃薯无毒试管微型薯的诱导及再生体系的建立第26-32页
   ·材料与方法第26-28页
     ·供试材料第26页
     ·植物生长调节剂第26页
     ·微型薯形成培养基的筛选第26-27页
     ·影响微型薯形成的蔗糖浓度筛选第27页
     ·影响微型薯形成的光照条件筛选第27页
     ·微型薯再生体系中植物激素的筛选第27-28页
     ·指标调查和统计分析第28页
   ·结果与分析第28-30页
     ·不同激素配比对微型薯形成的影响第28-29页
     ·不同蔗糖浓度对微型薯形成的影响第29页
     ·不同光照周期对微型薯形成的影响第29-30页
     ·微型薯再生体系中植物激素对其的影响第30页
   ·讨论第30-31页
     ·微型薯形成与培养基激素成分第30-31页
     ·微型薯形成与光周期第31页
     ·微型薯形成与蔗糖浓度第31页
   ·小结第31-32页
3 拟南芥CDPK1基因和RD29A启动子的克隆及植物表达载体的构建第32-46页
   ·材料与方法第32-37页
     ·试验材料第32页
     ·菌株与质粒第32页
     ·酶和生化试剂第32页
     ·PCR引物第32-33页
     ·基因组DNA提取第33页
     ·目的片段扩增第33-34页
     ·目的片段回收及加尾第34页
     ·PCR产物与p MD18-T载体的连接第34页
     ·大肠杆菌感受态的制备及转化第34-35页
     ·转化子蓝白斑筛选第35页
     ·重组转化子鉴定第35页
     ·构建植物表达载体第35-36页
     ·农杆菌电感受态细胞的制备第36-37页
     ·重组的植物表达载体转化农杆菌第37页
   ·结果与分析第37-43页
     ·CDPK1基因的扩增与克隆第37-39页
     ·Rd29A 5′端启动子序列的扩增与克隆第39-40页
     ·Ca MV 35S启动子驱动CDPK1表达的植物表达载体的构建与鉴定第40-41页
     ·Rd29A启动子驱动CDPK1表达的植物表达载体的构建与鉴定第41-43页
   ·讨论第43-44页
   ·小结第44-46页
4 P35S:CDPK1和P29A:CDPK1转基因马铃薯的获得与鉴定第46-56页
   ·材料与方法第46-50页
     ·供试材料第46页
     ·实验试剂第46页
     ·试剂配制第46-47页
     ·重组菌株的培养与活化第47页
     ·马铃薯转化方法第47页
     ·马铃薯转化植株的PCR检测第47页
     ·转基因马铃薯Southern杂交检测第47-50页
   ·结果与分析第50-53页
     ·CDPK1基因转化马铃薯第51页
     ·抗性马铃薯植株的PCR检测第51-52页
     ·转基因马铃薯Southern杂交鉴定第52-53页
     ·转基因马铃薯中CDPK1基因的表达第53页
   ·讨论第53-55页
   ·小结第55-56页
5 转CDPK1基因的马铃薯抗旱性研究第56-67页
   ·材料与方法第56-59页
     ·供验材料第56页
     ·转基因马铃薯的生理指标测定第56-58页
     ·转基因马铃薯的转录表达分析第58-59页
   ·结果与分析第59-64页
     ·转CDPK1基因马铃薯抗旱性外部形态表现第59-61页
     ·转CDPK1基因马铃薯抗旱性生理指标的变化第61-63页
     ·干旱胁迫对转基因马铃薯中CDPK1、P5CS和Pro DH基因表达的影响第63-64页
   ·讨论第64-66页
   ·小结第66-67页
6 结论与创新点第67-68页
致谢第68-69页
参考文献第69-83页
作者简介第83页

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