| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 英文缩略词 | 第7-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-21页 |
| ·鱼类弧菌病研究的历史与现状 | 第12-13页 |
| ·鱼类弧菌病原生物学研究 | 第13-14页 |
| ·弧菌毒力因子研究 | 第14-20页 |
| ·粘附因子 | 第14-16页 |
| ·脂多糖 | 第16页 |
| ·胞外产物 | 第16页 |
| ·摄铁系统 | 第16-18页 |
| ·分泌系统 | 第18页 |
| ·群体感应系统 | 第18-20页 |
| ·研究技术路线 | 第20页 |
| ·研究目的和意义 | 第20-21页 |
| 2 溶藻弧菌毒力相关基因 toxR、acfA 的克隆 | 第21-32页 |
| ·实验材料 | 第21-23页 |
| ·菌株与质粒 | 第21页 |
| ·实验仪器 | 第21-22页 |
| ·主要试剂 | 第22页 |
| ·主要溶液和试剂的配制 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-25页 |
| ·溶藻弧菌总 DNA 的提取 | 第23页 |
| ·DH5 感受态细胞的制备 | 第23-24页 |
| ·toxR 基因的克隆 | 第24页 |
| ·acfA 基因的克隆 | 第24-25页 |
| ·实验结果 | 第25-30页 |
| ·toxR 基因的克隆 | 第25页 |
| ·acfA 基因的克隆 | 第25-26页 |
| ·toxR 基因序列分析 | 第26-28页 |
| ·acfA 基因序列分析 | 第28-30页 |
| ·讨论 | 第30-32页 |
| 3 溶藻弧菌 toxR、acfA 基因插入失活突变株的构建 | 第32-43页 |
| ·实验材料 | 第32-33页 |
| ·菌株与质粒 | 第32-33页 |
| ·实验仪器 | 第33页 |
| ·主要试剂 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-37页 |
| ·大肠杆菌 MC1061 和 S17-1 感受态细胞的制备 | 第33页 |
| ·toxR、acfA 突变片段的克隆 | 第33-35页 |
| ·自杀质粒 pRE112 的提取 | 第35页 |
| ·酶切和酶切产物纯化 | 第35页 |
| ·连接和转化 | 第35页 |
| ·接合菌株的构建 | 第35-36页 |
| ·细菌接合试验 | 第36页 |
| ·对照菌株的构建 | 第36-37页 |
| ·实验结果 | 第37-41页 |
| ·toxR 基因插入失活突变株的构建 | 第37-38页 |
| ·acfA 基因插入失活突变株的构建 | 第38-40页 |
| ·对照菌株的构建 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| 4 突变株ΔtoxR、ΔacfA 的功能研究 | 第43-59页 |
| ·实验材料 | 第43-45页 |
| ·菌株 | 第43-44页 |
| ·实验动物 | 第44页 |
| ·实验仪器 | 第44页 |
| ·主要试剂 | 第44-45页 |
| ·实验方法 | 第45-47页 |
| ·突变株的遗传稳定性检验 | 第45页 |
| ·生长曲线测定 | 第45页 |
| ·细菌鞭毛观察 | 第45页 |
| ·生物膜检测 | 第45-46页 |
| ·胞外蛋白酶（ECPase）活性检测 | 第46页 |
| ·半致死率（LD50）检测 | 第46页 |
| ·蛋白质组学 | 第46-47页 |
| ·结果与分析 | 第47-57页 |
| ·突变株的遗传稳定性检验 | 第47-48页 |
| ·生长曲线 | 第48-49页 |
| ·鞭毛形成能力 | 第49-50页 |
| ·生物膜 | 第50-52页 |
| ·胞外蛋白酶（ECPase）活性 | 第52-53页 |
| ·半致死率（LD50） | 第53页 |
| ·蛋白质组学 | 第53-57页 |
| ·讨论 | 第57-59页 |
| 5 结论 | 第59-60页 |
| ·溶藻弧菌毒力相关基因 toxR、acfA 的克隆 | 第59页 |
| ·溶藻弧菌 toxR、acfA 基因插入失活突变株的构建 | 第59页 |
| ·突变株ΔtoxR、ΔacfA 的功能研究 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 作者简介 | 第72-73页 |
| 导师简介 | 第73页 |
