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两种蟾蜍(Bufo)MCL-1 cDNA的克隆及其重组蛋白表达与抗血清的制备

摘要第1-5页
ABSTRACT第5-11页
前言第11-12页
第一章 文献综述第12-22页
   ·BCL-2 家族蛋白特征及组成第12-14页
     ·BCL-2 家族蛋白特征第12-13页
     ·BCL-2 家族蛋白之间的相互作用第13页
     ·BCL-2 家族蛋白与肿瘤治疗第13-14页
   ·MCL-1 的生物学特性及功能第14-16页
     ·mcl-1 基因的结构第14页
     ·MCL-1 L 蛋白的结构及功能第14-16页
   ·MCL-1 的表达调控第16-18页
     ·转录水平的调节第16-17页
     ·转录后调节第17页
     ·翻译水平的调节第17页
     ·翻译后水平调节第17-18页
   ·MCL-1 与人类疾病第18-20页
     ·MCL-1 与多发性骨髓瘤第18-19页
     ·MCL-1 与白血病第19页
     ·MCL-1 与肝癌第19-20页
     ·MCL-1 与宫颈癌第20页
   ·MCL-1 与肿瘤的治疗第20-22页
第二章 日本蟾蜍 MCL-1 cDNA 的克隆及生物信息学分析第22-34页
   ·实验材料和试剂第22-24页
     ·材料和试剂第22页
     ·主要实验仪器第22-23页
     ·常用试剂及培养基的配制第23-24页
   ·方法第24-27页
     ·日本蟾蜍皮肤 mcl-1 cDNA 的盲筛第24-25页
       ·日本蟾蜍皮肤 cDNA 质粒文库转化第24页
       ·全长 cDNA 筛选第24页
       ·质粒回收及 DNA 测序第24-25页
       ·序列分析第25页
     ·日本蟾蜍皮肤 mcl-1 cDNA 的 PCR 克隆第25-27页
       ·引物设计第25页
       ·PCR 克隆日本蟾蜍皮肤全长 mcl-1 及 ORF第25-27页
   ·结果第27-31页
     ·cDNA 的筛选第27页
     ·序列分析第27-31页
       ·测序结果分析及其编码蛋白的理化性质第27-29页
       ·保守结构域及磷酸化位点预测第29-30页
       ·氨基酸序列同源性分析和系统进化树构建第30-31页
     ·MCL-1 序列多样性分析第31页
   ·讨论第31-34页
第三章 中华大蟾蜍 MCL-1 cDNA 及 ORF 的克隆及分析第34-42页
   ·材料与方法第34-36页
     ·试验动物第34页
     ·主要材料与试剂第34页
     ·方法第34-36页
       ·中华大蟾蜍皮肤总 RNA 的提取及其第一链 cDNA 的合成第34-35页
       ·中华大蟾蜍 mcl-1 cDNA 及 ORF 的克隆第35-36页
   ·结果第36-40页
     ·中华大蟾蜍皮肤总 RNA 的结果第36页
     ·中华大蟾蜍 mcl-1 cDNA 克隆第36-37页
     ·测序结果分析第37-39页
       ·中华大蟾蜍 mcl-1 ORF 序列第37-38页
       ·中华大蟾蜍 MCL-1 氨基酸序列比对第38-39页
     ·中华蟾蜍氨基酸序列同源性分析和系统进化树构建第39-40页
   ·讨论第40-42页
第四章 MCL-1 原核表达载体构建及重组蛋白表达第42-51页
   ·材料与方法第42-45页
     ·主要材料和试剂第42页
     ·缓冲液的配制第42-43页
       ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)缓冲液的配制第42-43页
       ·Western blotting 相关缓冲液的配制第43页
     ·实验方法第43-45页
       ·引物设计第43-44页
       ·pET-28b-mcl-1 重组表达载体的构建第44页
       ·重组蛋白的诱导表达第44页
       ·SDS-PAGE 电泳和考马斯亮蓝染色第44-45页
       ·免疫印迹(Western blotting)检测第45页
   ·结果第45-49页
     ·pET-28b-mcl-1 重组表达载体的构建第45-46页
     ·亚克隆测序结果分析第46-47页
     ·SDS-PAGE 检测重组蛋白 MCL-1 的诱导表达第47-49页
       ·日本蟾蜍 MCL-1 重组蛋白的诱导表达第47-48页
       ·中华大蟾蜍 MCL-1 重组蛋白的诱导表达第48-49页
   ·讨论第49-51页
第五章 MCL-1 抗血清的制备及效价检测第51-59页
   ·材料及溶液配制第51-52页
     ·实验动物及材料第51页
     ·溶液配制第51-52页
       ·包涵体提取缓冲液的配制第51页
       ·ELISA 相关试剂的配制第51-52页
   ·方法第52-54页
     ·重组蛋白的可溶性检测第52页
     ·重组蛋白包涵体提取第52-53页
     ·BSA 标准曲线的绘制及 MCL-1 蛋白浓度的测定第53-54页
     ·MCL-1 抗血清的制备第54页
     ·酶联免疫法(ELISA )检测抗血清第54页
     ·Western blotting 检测抗血清第54页
   ·结果第54-57页
     ·可溶性检测及大量表达第54-56页
       ·可溶性检测结果第55页
       ·大量表达结果第55-56页
     ·BSA 标准曲线的绘制第56页
     ·ELISA 检测结果第56页
     ·Western blotting 检测结果第56-57页
   ·讨论第57-59页
第六章 结论与展望第59-61页
   ·结论第59页
   ·展望第59-61页
参考文献第61-69页
附录第69-70页
作者简介第70-71页
致谢第71页

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